● 8大質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
華美生物CUSABIO ELISA試劑盒是試劑配備完整、質(zhì)控嚴(yán)格、經(jīng)過驗證的即用型ELISA試劑盒。在研發(fā)的過程中，采取多個嚴(yán)控的步驟以保證試劑盒的卓越品質(zhì)，保證提供給客戶的產(chǎn)品具有線性、特異性、穩(wěn)定性和靈敏度等的高標(biāo)準(zhǔn)。
通過線性范圍來計算出實際的檢測樣本值，定量試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)R大于0.99。以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| ng/ml | OD1 | OD2 | Average | Corrected |
|---|---|---|---|---|
| 100 | 2.839 | 2.897 | 2.868 | 2.718 |
| 50 | 1.968 | 1.974 | 1.971 | 1.821 |
| 25 | 1.144 | 1.192 | 1.168 | 1.018 |
| 12.5 | 0.709 | 0.733 | 0.721 | 0.571 |
| 6.25 | 0.433 | 0.450 | 0.441 | 0.291 |
| 3.125 | 0.303 | 0.301 | 0.302 | 0.152 |
| 1.562 | 0.242 | 0.223 | 0.233 | 0.083 |
| 0 | 0.149 | 0.151 | 0.150 |
樣本經(jīng)梯度稀釋后檢測分析即為線性分析。線性是試劑盒準(zhǔn)確度和特異性的判定標(biāo)準(zhǔn)。為了評估測定的線性，在各種基質(zhì)中加入高濃度分析物的樣品，并用樣品稀釋劑稀釋以產(chǎn)生具有在測定的動態(tài)范圍內(nèi)的值的樣品。對每種經(jīng)驗證樣品類型進行稀釋線性測試，如果結(jié)果是每種稀釋預(yù)期濃度的80%-120%，則視為良好。線性對于檢測動態(tài)范圍內(nèi)分析物濃度的精確測量非常重要。
以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例：
血清樣品在1：100，1：200，1：400，1：800下稀釋。細胞培養(yǎng)物上清液在,1：2， 1：4，1：8，1:16下稀釋。測試值在80-120％之間并顯示出良好的線性。
| Sample | Serum(n=4) | |
|---|---|---|
| 1:100 | Average( %) | 91 |
| Range ( %) | 85-97 | |
| 1:200 | Average( %) | 97 |
| Range ( %) | 91-103 | |
| 1:400 | Average( %) | 93 |
| Range ( %) | 85-95 | |
| 1:800 | Average( %) | 95 |
| Range ( %) | 90-100 |
| Sample | Cell Culture Supernates(n=4) | |
|---|---|---|
| 1:1 | Average( %) | 95 |
| Range ( %) | 83-101 | |
| 1:2 | Average( %) | 97 |
| Range ( %) | 86-115 | |
| 1:4 | Average( %) | 90 |
| Range ( %) | 83-98 | |
| 1:8 | Average( %) | 91 |
| Range ( %) | 80-107 |
最低檢測限是靈敏度的測試指標(biāo)。由使用的抗體效價等決定的，在研發(fā)過程中，一般會優(yōu)化保證高靈敏度、低背景的檢測結(jié)果從而大大提高試劑盒的靈敏度。檢測限越低，靈敏度越高。通過將零標(biāo)準(zhǔn)重復(fù)獲得的平均 O.D. 加上3個標(biāo)準(zhǔn)偏差來確定靈敏度。
CV (%) 或變異系數(shù)代表了測定的一致性，即同一樣本重復(fù)測定的符合程度。
一般是選取同一批次或者不同批次的試劑盒對不同濃度的樣本進行定量檢測，需要盡量降低批次差異帶來的系統(tǒng)誤差，保證相同樣本結(jié)果的重復(fù)性。
應(yīng)考慮兩種類型的精度：批內(nèi)精確度和批間精確度。
批內(nèi)精確度：同一批次內(nèi)精密度測試方法：用低、中、高值待測樣本對同一批次的產(chǎn)品分別重復(fù)測定20次(n)，計算該20次測量結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，根據(jù)公式CV＝標(biāo)準(zhǔn)差/平均值×100％，計算變異系數(shù)(CV)，以評估CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）的精確度：CV％<8％。
批間精確度：不同批次間精密度測試方法：用低、中、高值待測樣本，對3個批次的產(chǎn)品分別重復(fù)測定20次(n)，計算該20次測量結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，根據(jù)公式CV＝標(biāo)準(zhǔn)差/平均值×100％，計算變異系數(shù)(CV)，以評估CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）的精確度：CV％<10％。
| Intra-Assay Precision | Inter-Assay Precision | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| Mean(ng/ml) | 5.345 | 16.273 | 29.471 | 29.471 | 20.841 | 34.563 |
| SD | 0.24 | 0.62 | 0.62 | 0.43 | 1.65 | 2.34 |
| CV(%) | 4.49 | 3.81 | 6.42 | 5.14 | 7.92 | 6.77 |
特異性是ELISA試劑盒的關(guān)鍵指標(biāo)。主要受到不同物種間的高同源性蛋白、靶蛋白配體或靶蛋白受體的干擾。CUSABIO選擇具有高特異性的原料，以確保ELISA試劑盒的優(yōu)異特異性，分析交叉反應(yīng)和干擾，確認只能識別和檢測目標(biāo)分析物。
回收率=靶蛋白的測定濃度/添加的靶蛋白濃度*100%
它反映了樣品分析過程中分析物的損失程度，回收率越高，準(zhǔn)確度越高。
回收實驗可檢測試劑盒是否受干擾因子的影響，以不添加蛋白的天然樣本基質(zhì)為空白對照，回收率應(yīng)介于80%-120%，表明試劑盒的性能較好。
以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素，ADP ELISA試劑盒）為例的回收率。
| Sample Type | Average(%) | Range(%) |
|---|---|---|
| Serum (n=5) | 95 | 89-98 |
| EDTA plasma (n=4) | 97 | 90-100 |
穩(wěn)定性越好，存儲時間越長。
通常采用加速降解的方法來推斷試劑盒的有效期。通常試劑盒在37℃放置一天折合有效期2個月，實際工作中，一般將試劑盒在37℃破壞4-7天后，然后檢測上述指標(biāo)，觀察是否在范圍內(nèi)。也可留樣至有效期后進行檢驗，來衡量有效期，對于批量大的指標(biāo)，可將加速降解和留樣檢驗相結(jié)合的方法。
將CUSABIO ELISA試劑盒的主要原料和測定板在37℃下熱損傷測試7天，然后與在4℃下儲存的原料進行比較。 7天后，OD值≤30％，這是合格的。部分試劑能經(jīng)受住60度高溫的熱損傷，最大程度的避免了長途運輸和保存過程中抗原抗體的失活。
避免使用有外源性污染的樣本，避免血樣本出現(xiàn)溶血、細菌污染，最好使用較新鮮樣本，避免反復(fù)凍融。
CUSABIO ELISA試劑盒可以檢測天然樣品，根據(jù)靶點性質(zhì)對天然樣本進行選擇（血清，血漿、細胞上清等），為客戶提供最真實的實驗數(shù)據(jù)參考。
以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例，我們在之前以1：500稀釋度測試血清和血漿樣品，測試值為S3-S5。
● 15大研究領(lǐng)域
● 涵蓋20+種屬
華美生物 ELISA試劑盒涵蓋20多個種屬，涉及多個研究領(lǐng)域，可滿足不同客戶的需求。
● 檢測樣本豐富
華美生物ELISA試劑盒可檢測多種生物樣品，包括：血清、血漿、體液如尿液、細胞培養(yǎng)上清液和細胞/組織裂解液等。
● 科研即用型
每個ELISA試劑盒由包被好抗體的板子和即用型試劑組成。無需特殊處理，操作簡單。
● 27,000+已發(fā)表文獻
華美生物ELISA試劑盒受到全球數(shù)千名研究人員的信賴，并引用到了許多優(yōu)秀的高分期刊上，如：Nature,Science, Cell, Immunity, Nature Medicine, Cell Metabolism, Gastroenterology 等。
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