ELISA常見問題及解答
Q: 什么是ELISA？ELISA的常見步驟是什么？
ELISA是酶聯(lián)免疫吸附試驗的縮寫，用于檢測特定蛋白質(zhì)的存在并確定其濃度。ELISA包括三種類型：“夾心法”（sandwich ELISA）、競爭法（competitive ELISA）和間接法（indirect ELISA）。常見的步驟包括儲存、試劑準備、ELISA板處理、樣本或試劑加入、孵育、洗滌和讀取。請參考我們的說明書以獲取詳細信息。
Q: CUSABIO的ELISA試劑盒適用于哪種物種？能否在說明書未提及的物種中使用你們的ELISA試劑盒？
不同的ELISA試劑盒適用于不同的物種，包括人類、大鼠、馬、兔、小鼠、綿羊、豬、牛、狗、雞、魚、猴子、植物等。請參考每個試劑盒的說明書以了解適用的物種。對于不同的物種，抗體的特異性和基質(zhì)干擾也會有所不同。如果您在尋找適用于您所需物種的試劑盒方面遇到困難，可點擊右側(cè)在線聯(lián)系客服，我們可以為您推薦合適的試劑盒。
Q: CUSABIO的ELISA試劑盒進行了哪些質(zhì)量控制和性能評估？
CUSABIO的ELISA試劑盒都在嚴格的質(zhì)控標準下對下述指標進行了仔細評估，包括：線性范圍、線性、檢測下限、精密度、回收率、穩(wěn)定性、特異性和天然樣品檢測等，以確保良好的性能。點擊此處了解更多關(guān)于質(zhì)量控制的信息。
Q: CUSABIO的ELISA試劑盒中是否包含標準品或?qū)φ掌罚?/p>
我們在定性ELISA試劑盒中提供陽性和陰性對照品，而在定量ELISA試劑盒中，我們提供可以作為質(zhì)量控制的標準品。試劑盒的標準品和整個試劑體系是相匹配的。通過實驗，客戶可以繪制出良好的標準曲線，證明包括標準品在內(nèi)的整個系統(tǒng)運行良好，因此標準品可以發(fā)揮質(zhì)量控制的作用。建議對標準品進行復孔。
Q: 每次測試中需要做多少次ELISA標準品和樣本？
建議每個標準品和樣本都做復孔。
Q: 可以混合使用兩種不同ELISA試劑盒的試劑嗎？是否能只購買試劑盒中的標準品/抗體？
不可以，不同批次號的ELISA試劑盒中的試劑不能混合使用，而且我們不單獨銷售試劑盒中的組分。希望您能理解。
Q: CUSABIO的試劑盒中是否添加了BSA和防腐劑？你們的終止溶液是什么？
ELISA試劑盒中的某些組分含有BSA。我們在大多數(shù)ELISA試劑盒中使用商業(yè)Proclin 300作為防腐劑，2N硫酸作為終止溶液。
Q: 可以在室溫下進行孵育嗎？
除了食品安全和藥物殘留ELISA試劑盒外，所有ELISA試劑盒的孵育溫度均為37℃，因為這是抗原和抗體結(jié)合的最佳溫度。我們不建議在室溫下進行孵育，因為室溫不穩(wěn)定。
Q: TMB是什么？為什么在使用TMB系統(tǒng)測試樣本時應該使用雙光譜？
TMB（3,3',5,5'－四甲基聯(lián)苯胺）是ELISA中使用的顯色底物。TMB可以作為氫供體，通過過氧化酶（如辣根過氧化酶）催化過氧化氫的還原反應，將其轉(zhuǎn)化為水。加入終止溶液后，反應停止，孔中發(fā)展的顏色從藍色變?yōu)辄S色。吸光度值應該在450 nm波長下測量。我們建議使用雙光譜測試樣本，以避免底部的干擾和劃痕導致的誤差。
Q: 當加入終止溶液后，為什么整個板孔中會出現(xiàn)黃色或淺黃色？
可能存在的原因有：
a. 添加的試劑不正確。您應該檢查試劑的成分和批號，確保使用的是試劑盒中正確的試劑。
b. 洗板不充分。您應該確保在每個洗滌步驟中，所有孔中的緩沖液體積相同。在最后一次洗滌后，用紙巾強力吸干板上的殘留緩沖液。
c. 移液管頭或顯色試劑容器受到酶偶聯(lián)物的污染，或空白孔受到陽性對照物的污染。您應該在試劑之間更換移液管頭，并為每個試劑使用單獨的儲液池。操作過程中使用移液器。
d. 底物暴露在光線下或在使用前受到污染。在準備投入孔中之前，應將底物放置在黑暗中保存。
e. 檢測抗體或親和素-HRP的濃度過高。您應該檢查計算或進一步稀釋后再次嘗試。
f. 孵育時間或顯色時間過長。您應嚴格按照試劑盒的方案進行操作。
g. 在讀取時使用了錯誤的波長。波長應為450nm，對于TMB還應進行650nm波長校正。
Q: 當顯色完成后，為什么整個板孔中包括陽性對照的孔中沒有發(fā)展出任何顏色？
可能存在的原因有：
a. 使用了錯誤的試劑。在準備或使用時，請仔細檢查標簽。
b. 在洗滌或樣品加入步驟中，由于酶偶聯(lián)物的污染，導致顯色試劑失活。您應確保酶偶聯(lián)物容器中沒有酶抑制劑。檢查并確保洗滌緩沖液容器干凈。
c. 錯誤地使用了某個試劑或步驟。您應仔細閱讀試劑盒的方案，并嚴格遵循每個步驟。
Q: 為什么標準品和樣本的孔中出現(xiàn)了弱顏色？
可能存在的原因有：
a. 試劑過期或儲存不當。您應按照試劑盒的方案進行良好的儲存，并在過期日期之前使用。避免污染。
b. 使用前，試劑和樣本未達到室溫。您應將所有試劑和樣本放置在室溫下30分鐘。
c. 移液吸液不足，吐液速度過快，吸液管壁上液體過多或吸液管壁不潔凈。您應使用校準過的移液器，確保移液管頭與其完全匹配，并緩慢移液。建議一次性使用。
d. 孵育時間不足。您應準確設(shè)置計時器。
e. 顯色時間不足。您應在15—30分鐘內(nèi)進行顯色。通常情況下，20分鐘是最佳時間，除非另有指示。
f. 顯色試劑添加順序錯誤。您應嚴格按照試劑盒的方案進行操作。
g. 過多的洗滌或濃縮洗滌緩沖液稀釋不當。您應減少洗滌的沖擊力：稀釋濃縮洗滌緩沖液，控制洗滌時間，并根據(jù)手冊記錄洗滌次數(shù)和劑量。
h. 水質(zhì)不合格。當準備洗滌緩沖液完成后，請檢查并確保其pH為中性。
i. 在洗滌或樣品加入步驟中，由于酶偶聯(lián)物的污染，導致顯色試劑失活。您應確保酶偶聯(lián)物容器中沒有酶抑制劑。檢查并確保洗滌緩沖液容器干凈。確保純凈水沒有污染。
Q: 為什么標準曲線看起來正常，但是樣本的孔中出現(xiàn)了弱顏色？
可能存在的原因有：
a. 樣本中的NaN3防腐劑抑制了酶的反應。您應避免在樣本中使用此防腐劑。
b. 在檢測的樣本中沒有強陽性樣本，結(jié)果是正常的。如果您有任何疑問，應重復試驗。
Q: 為什么以肉眼看結(jié)果正常但讀數(shù)較低？
在讀數(shù)時使用了錯誤的濾光片。波長應為450nm，并使用650nm波長校正TMB。
Q: 為什么重復性差？
可能存在的原因有：
a. 試劑盒儲存不當或儲存環(huán)境差。您應按照數(shù)據(jù)表上的建議儲存所有組分，而不是在室溫下過長時間。
b. 標準的制備不正確。您應根據(jù)試劑盒的方案，使用推薦的稀釋劑嚴格重構(gòu)標準。在使用前的10分鐘內(nèi)準備好試劑，并迅速加入孔中。
c. 添加樣本后混勻不充分。當同時添加多個試劑時，您應在渦旋混合器中充分混合試劑。在持有試劑時要小心，避免濺出。
d. 孔讀數(shù)重復性差。您應校準酶標儀。
e. 孵育時間、洗滌條件、顯色條件和操作者不一致。您應重復標準的實驗。確保反應條件和操作者一致。
f. 洗滌不當。您應使用移液管加入200μL的洗滌緩沖液，或者用移液管充分填滿每個孔，但不允許溢出。檢查酶標板洗滌器的所有孔口，確保充分的洗滌。
g. 溫度不均勻。您應在孵育期間保持恒定溫度，避免溫度波動。
h. 加樣本時壁面殘留過多或移液管尖端劃傷孔底。您應緩慢、小心地將移液管尖端沿孔壁降低，避免觸碰孔底。
i. 重復使用材料。您應在樣本之間更換移液管尖端，在試劑之間更換儲液器。
j. 偶爾在截斷值附近出現(xiàn)的陽性和陰性值。您應對同一樣本設(shè)置3個重復測量，并在2個樣本中獲得相同的結(jié)果。
k. 加樣本時的交叉污染。您應在添加樣本時避免交叉污染。
Q：為什么出現(xiàn)異常顏色？
可能存在的原因有：
a. 手動洗滌時發(fā)生交叉污染。您應在手動洗滌時，在填充洗滌緩沖液3次后立即將孔中液體清除，并在下一次設(shè)定浸泡時間以減少交叉污染。
b. 敲擊酶標板時發(fā)生交叉污染。您應在敲擊酶標板時使用適當?shù)募埥怼２灰獙o關(guān)材料帶入酶標板中。不要在同一位置敲擊以避免交叉污染。
c. 樣本長時間儲存導致污染。您應保持樣本新鮮，或在低溫下儲存以避免污染。
d. 由于孔洗滌器堵塞而導致填充不足或殘留過多引起的異常發(fā)展顏色。您應使用移液管充分填滿每個孔，但不允許溢出。檢查酶標板洗滌器的所有孔口，確保充分的洗滌。
e. 樣本離心不完全導致凝固物或沉淀物的凝結(jié)或干擾。您應完成血清和血漿的離心。
f. 洗滌緩沖液的準備錯誤或濃縮洗滌緩沖液的錯誤使用。您應按照手冊的要求準備洗滌緩沖液。
Q: 孔板是否預涂層？如果無法一次性使用完剩余的孔或孔板，應該如何儲存？
是的，酶標板是預包被的。建議將需要進行試驗的孔單獨拆出，并將其余的部分在2-8℃的暗處存儲，避免細菌污染。
