去垢劑技術(shù)平臺
1. 背景和基本原理
跨膜蛋白在細(xì)胞功能調(diào)控和信號傳導(dǎo)中發(fā)揮著重要作用，在生物學(xué)研究和藥物開發(fā)中具有極高的價值 [1]。然而，傳統(tǒng)的表達(dá)系統(tǒng)很難實(shí)現(xiàn)跨膜蛋白的有效表達(dá)和提取，這主要是由于跨膜蛋白具有復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)和疏水性特征 [2]。去垢劑技術(shù)平臺，通過在細(xì)胞膜上形成洗滌劑小分子團(tuán)簇（detergent micelle），模擬細(xì)胞膜的環(huán)境，可實(shí)現(xiàn)跨膜蛋白的表達(dá)和提取 [3]。
2. 去垢劑技術(shù)與表達(dá)系統(tǒng)
去垢劑技術(shù)可以應(yīng)用于多種表達(dá)系統(tǒng)，包括細(xì)菌、酵母、昆蟲細(xì)胞、哺乳動物細(xì)胞和無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。每種表達(dá)系統(tǒng)都有其獨(dú)特的優(yōu)缺點(diǎn)，需要根據(jù)實(shí)際需求進(jìn)行選擇。
無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)在于可以在較短的時間內(nèi)獲得目標(biāo)蛋白，無需細(xì)胞培養(yǎng)和分離步驟，同時可以更好地控制實(shí)驗(yàn)條件 [4]。應(yīng)用去垢劑技術(shù)，無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)可以通過添加合適的洗滌劑來實(shí)現(xiàn)跨膜蛋白的表達(dá)和穩(wěn)定 [5]。然而，無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)在蛋白質(zhì)翻譯、折疊和修飾方面可能存在一定的局限性 [6]。
3. 跨膜蛋白的提取和純化
在使用去垢劑技術(shù)提取和純化跨膜蛋白時，關(guān)鍵的一步是選擇合適的洗滌劑。洗滌劑的類型、濃度和溫度等條件對跨膜蛋白的提取效果具有顯著影響 [7]。在實(shí)驗(yàn)過程中，需要嘗試不同的洗滌劑，以優(yōu)化蛋白提取的效果。此外，純化方法的選擇也對最終獲得的跨膜蛋白質(zhì)量產(chǎn)生重要影響，可以采用諸如親和層析、離子交換層析和凝膠滲透層析等技術(shù) [8]。
4. 華美生物去垢劑平臺技術(shù)優(yōu)勢
華美生物在長期積累的跨膜蛋白表達(dá)和純化經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過多種去垢劑的選擇和聯(lián)合使用，可有效提高總蛋白中目的跨膜蛋白含量，且保證其構(gòu)象正確、穩(wěn)定。平臺優(yōu)勢特色如下：
- 可全長表達(dá)多次跨膜蛋白，不僅僅只限于ECD表位
- 可精確定量，區(qū)別于VLP和Nanodisc平臺
- 可應(yīng)用于免疫/ELISA/SPR/BLI
目前，華美生物通過改良的跨膜蛋白純化技術(shù)，已成功開發(fā)出12次跨膜的SLC7A11等蛋白、7次跨膜的EDNRB、ACKR1、CCR2等蛋白、6次跨膜的AQPZ、AQP1等蛋白、5次跨膜的ABCD1等蛋白、3次跨膜的SLC31A1等蛋白以及1次跨膜的SLFN12L蛋白等稀缺產(chǎn)品。
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