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Your Good Partner in Biology Research

酵母表達純化服務

酵母蛋白表達系統是一種高經濟性的真核表達系統,可分泌表達表達也可胞內表達。

酵母表達外源基因具有一定的翻譯后加工能力,所表達的外源蛋白質具有一定程度上的折疊加工和糖基化修飾,性質較原核表達的蛋白質更加穩定,特別適用于真核基因表達和功能蛋白的制備。

酵母分泌表達可以將表達的外源蛋白分泌到細胞外基質中,因此更容易獲得高純度蛋白。

酵母表達系統具有的諸多優勢使其研究和應用越來越廣泛。

系統優勢

  • 無自產內毒素;
  • 產物可翻譯后修飾:糖基化、磷酸化、酰酯化等,蛋白具有生物活性的可能性更高;
  • 產物可正確折疊和高效分泌;
  • 性質較原核表達的蛋白質更加穩定,特別適合于表達和制備具有功能的蛋白:如結核類蛋白、防御素類蛋白、白介素蛋白及細胞因子等。

服務優勢

  • 無風險定制,不成功不收費;
  • 特有的PickRight技術,轉化后免篩選直接可獲得高表達量菌株,相比傳統篩選節省5-10個工作日;
  • 高產量:搖瓶培養條件下高達100mg/L;
  • 高性價比:價格低至5200元起;
  • 貨期短:最短35工作日即可交付。

我們承諾

無風險定制,不成功不收費

注:該無風險定制蛋白服務僅適用于800個氨基酸以內的蛋白質。如果您需要表達超過800個氨基酸的蛋白質,我們將按步驟收費。

服務內容

步驟 服務項目 服務說明 華美生物特色 周期
1 表達載體構建
密碼子優化全基因合成 多載體優化
為了提高的表達成功率以及獲得更高表達量,除常規N端融合表達蛋白外,我們還提供C端融合標簽,在確保純度的同時使其具有活性可能更高。
8-10工作日
PCR擴增產物酶切連接到pPic9k,pPic3.5k,pPiczαA等載體上
轉化TOP10宿主
獲得測序正確的重組質粒
2 轉化及菌株鑒定
重組質粒大量制備 高拷貝篩選
通過不同載體特有的篩選標記進行多輪篩選,逐步得到表達量最高的菌株。
銅離子脅迫專利
轉化后免篩選直接可獲得高表達量菌株,時間相比傳統篩選減少5-10工作日。
5-18工作日
線性化重組質粒
電擊轉化至GS115、X33、KM71等宿主
PCR鑒定挑選陽性菌株
用遺傳霉素G418、Zeocion等抗生素進行多拷貝子篩選,獲得高拷貝子
3 小試及放大表達純化
小試表達篩選(20-40株) 9-12工作日/12-17工作日(特色純化)
定株,優化表達條件  
放大培養
通過親和、離子交換、疏水及分子篩等多種層析方法純化目的蛋白 多條件純化策略(可選)
完善的DOE方案,利用AKTA對離子交換、疏水等層析條件進行摸索,鎖定最適純化策略。
4 其他(可選)
通過酶切去除標簽或采用無標簽載體表達 靈活的附加服務(可選)
提供多種附加服務,客戶可根據實驗需求靈活選擇
3工作日
提供無菌過濾及內毒素去除服務 2工作日
5 質控
蛋白濃度、純度等檢查,并提供QC報告 詳細的質控報告
為每個項目提供產品說明書及完善的質控報告
3-5工作日
總時間 25-35工作日

特色表達體系

● pPic9k-JT質粒+GS115菌株高效表達

載體特色

  • 攜帶有AOX1強啟動子,含有alpha分泌因子可高效分泌表達;
  • 無縫克隆連接不懼任何內切酶位點;
  • 多個線性化位點:SalⅠ,SacⅠ,BglⅡ;
  • 原核階段可進行Amp和Kan雙抗性篩選陽性菌株;
  • 真核階段可進行His+和G418篩選高表達菌株;
  • 改造過的多克隆位點,克隆不受目的基因中潛在的核酸內切酶位點限制;
  • 載體自帶his 標簽,方便克隆與純化。

● pPic9k-SUMOSTAR質粒+GS115菌株高效表達

載體特色

  • 攜帶有AOX1強啟動子,含有alpha分泌因子可高效分泌表達;
  • 含有SUMOSTAR融合蛋白,具有很強促表達能力;
  • 無縫克隆連接不懼任何內切酶位點;
  • 含有EK酶切位點,酶切可得到無標簽蛋白;
  • 多個線性化位點:SalⅠ,SacⅠ;
  • 原核階段可進行Amp和Kan雙抗性篩選陽性菌株;
  • 真核階段可進行His+和G418篩選高表達菌株;
  • 改造過的多克隆位點,克隆不受目的基因中潛在的核酸內切酶位點限制;
  • 載體自帶his 標簽,方便克隆與純化。

案例展示

案例1: 酵母表達系統表達高純度蛋白

難點:酵母胞內表達,破菌后純化,可以看出裂解液中雜蛋白非常多(泳道1),目的蛋白非常不明顯,經過酵母系統特有的層析系統一次純化,用SDS-PAGE檢測看不到雜帶,純度達到95%以上(泳道6-7)。

泳道1:裂解液
泳道2:上樣穿透液
泳道3:Marker
泳道4-7:不同梯度洗脫下來的目的蛋白

泳道1:裂解液
泳道2:上樣穿透液
泳道3:Marker
泳道4-7:不同梯度洗脫下來的目的蛋白

特點:酵母分泌表達,蛋白表達后直接分泌到培養基中,基本無雜蛋白,本身純度就高達90%以上,通過純化主要是去除色素及培養基中其他殘留物質,只留下在適宜緩沖中的目的蛋白。

泳道1:發酵液上清
泳道2:Marker
泳道3:上樣穿透液
泳道4:洗脫下來的目的蛋白

 

案例2: 酵母表達系統表達大分子量蛋白

難點:700氨基酸以上,81kDa,為了得到較高純度,選擇分泌載體進行表達,成功表達并分泌出來。

N-terminal GST-tagged

泳道1:發酵液上清
泳道2:上樣穿透液
泳道3:洗脫下來的目的蛋白
泳道4:Marker

 

案例3: 酵母表達系統表達小分子蛋白

難點:46氨基酸,7kDa,分子量非常小,相對來說不太容易檢測及濃縮,從SDS-PAGE檢測圖來看表達、純化、收集都非常成功。

泳道1:發酵液上清
泳道2:洗脫下來的目的蛋白
泳道3:Marker

難點:36氨基酸以上,4kDa,分子量非常小,而且這個客戶要求切除標簽,在分子量本身就很小的情況下切除標簽是非常有難度的,但我們經過一系列處理后成功將標簽切除,且WB用標簽抗體檢測目的蛋白中不含蛋白標簽,最終得到了高純度、小分子量的無標簽蛋白。


案例4:酵母表達系統表達N-型糖基化修飾蛋白

特點:接近天然蛋白的修飾,尤其是糖基化修飾在酵母表達系統特別明顯,用SDS-PAGE檢測呈彌散狀條帶且偏大,經過去N-型糖基化修飾的Endo H酶消化,帶型變實且大小與理論值吻合。

泳道1:純化后的目的蛋白(N-型糖基化修飾)
泳道2:經Endo H去糖基化修飾后的蛋白
泳道3:Marker

 

聯系信息

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武漢華美生物工程有限公司成立于2007年12月,是一家集科研、生產、銷售為一體的生物高新技術企業。并形成了以CUSABIO為品牌的ELISA試劑盒、蛋白、抗體等多種優質產品,遠銷歐美日德等九十多個國家。
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