DT3C是一種重組蛋白，由一個沒有受體結合域的白喉毒素diphtheria toxin (DT)和鏈球菌蛋白G（Streptococcus protein G）的C1、C2、C3（3C）結構域構成 ，主要用于體外檢測靶細胞對單克隆抗體的內化效率。
DT3C主要應用領域：
- 抗體內化效率的體外評估
- ADC藥物研究
- 抗體篩選和評估
DT3C的技術優勢：
相比于目前常見的抗體內化效率檢測技術（如酸性緩沖液洗脫法、mAb-ZAP法、pHrodo技術等），DT3C重組蛋白測定抗體內化具有操作簡單、精準量化的特點，具有廣闊的應用前景。
- 制備簡單：僅需在室溫下孵育30分鐘即可形成mAb-DT3C偶聯物；
- 多物種適用性：可與來自不同物種的任何IgG結合，形成mAb-DT3C偶聯物；
- 快速評估：使用流式細胞術或熒光顯微鏡等技術，可以快速且準確地檢測單克隆抗體（mAb）在細胞表面的內化效率；
- 內化效率高：抗體內化效率明顯高于Mab-ZAP
可體外檢測ADC抗體內化效率
抗體內化效率明顯高于Mab-ZAP
參考文獻：M. Yamaguchi et al. Biochemical and Biophysical Research Communications 454 (2014) 600–603.
華美生物 DT3C重組蛋白：
華美生物用大腸桿菌表達系統所表達的DT3C重組蛋白，經SDS-PAGE驗證，SEC-HPLC檢測，純度高于90%；
我們用不同濃度的DT3C蛋白與CCR8抗體37℃孵育30min后加入培養板培養48h；EC50分別為0.5795-1.400 μg/mL、0.5608-1.318 μg/mL。
CT26/Human CCR8 Stable Cell Line：5000cells/孔；
BMK-1/2：10μg/mL
如何用DT3C檢測抗體內化效率？
實驗步驟：
- ① 細胞培養：準備對數培養期細胞，對細胞計數并鋪板；
- ② DT3C與抗體混合液的配置：在37°C將mAb和DT3C孵育30分鐘，形成mAb-DT3C偶聯物；
- ③ 細胞處理：將mAb-DT3C偶聯物添加到細胞培養基中，使其與細胞相互作用；
- ④ 內化效率評估：使用MTT或其他方法檢測mAb在細胞表面的內化效率。
