不同免疫方案對多克隆抗體的多樣性和親和力有什么影響？
日期：2025-12-26 16:44:50
不同免疫方案（基礎(chǔ)免疫+加強(qiáng)免疫次數(shù)、佐劑類型）會從B細(xì)胞克隆激活、親和力成熟等核心環(huán)節(jié)，直接調(diào)控多克隆抗體的多樣性和親和力，二者的影響規(guī)律各有側(cè)重且相互關(guān)聯(lián)。
一、基礎(chǔ)免疫+加強(qiáng)免疫次數(shù)的影響
1、對抗體多樣性的影響
基礎(chǔ)免疫是首次給機(jī)體引入抗原，此時僅能激活體內(nèi)一部分識別抗原優(yōu)勢表位的初始B細(xì)胞克隆，因此產(chǎn)生的抗體多樣性相對有限。當(dāng)進(jìn)行第一次加強(qiáng)免疫時，抗原會再次刺激免疫系統(tǒng)，除了激活更多針對優(yōu)勢表位的B細(xì)胞，還能喚醒一部分識別抗原稀有表位的B細(xì)胞克隆，抗體多樣性會出現(xiàn)明顯提升。后續(xù)的2–3次加強(qiáng)免疫會持續(xù)擴(kuò)大被激活的B細(xì)胞克隆譜，進(jìn)一步豐富抗體的多樣性。
但當(dāng)加強(qiáng)免疫次數(shù)超過3–4次后，這種提升效果會逐漸放緩，甚至出現(xiàn)下降——因?yàn)榇藭r體內(nèi)針對優(yōu)勢表位的高親和力B細(xì)胞克隆會過度增殖，擠占稀有表位B細(xì)胞的生存和活化空間，反而壓縮了抗體的多樣性范圍。
2、對抗體親和力的影響
基礎(chǔ)免疫后產(chǎn)生的抗體親和力普遍較低，這是因?yàn)榇藭r分泌抗體的漿細(xì)胞大多未經(jīng)歷充分的親和力成熟過程，抗體與抗原的結(jié)合能力較弱。加強(qiáng)免疫是驅(qū)動親和力成熟的關(guān)鍵：二次及以上的抗原刺激會促使記憶B細(xì)胞進(jìn)入淋巴結(jié)生發(fā)中心，發(fā)生體細(xì)胞高頻突變，那些突變后能更高效結(jié)合抗原的B細(xì)胞克隆會被優(yōu)先選擇和擴(kuò)增，分化為高親和力漿細(xì)胞，從而使抗血清中高親和力抗體的比例大幅上升。
通常經(jīng)過2–3次加強(qiáng)免疫后，抗體親和力會達(dá)到峰值；若繼續(xù)增加加強(qiáng)次數(shù)，親和力的提升會變得十分微弱，還可能因免疫疲勞導(dǎo)致抗體效價下降。
二、佐劑類型的影響
佐劑通過改變抗原的遞呈方式、激活固有免疫通路，間接影響抗體的多樣性和親和力，不同類型佐劑的作用效果差異顯著。
1、弗氏完全佐劑（CFA）
它含有滅活分枝桿菌和礦物油，既能形成抗原儲存庫實(shí)現(xiàn)抗原的緩慢釋放，持續(xù)刺激免疫細(xì)胞，又能激活固有免疫的TLR通路，強(qiáng)效激活免疫應(yīng)答。在多樣性方面，它能最大程度激活針對抗原不同表位的B細(xì)胞克隆，包括大量稀有表位對應(yīng)的克隆，是提升抗體多樣性效果最強(qiáng)的佐劑；在親和力方面，它能高效驅(qū)動生發(fā)中心的親和力成熟過程，顯著提升抗體與抗原的結(jié)合能力。
2、弗氏不完全佐劑（IFA）
僅含礦物油，無分枝桿菌成分，只能形成抗原儲存庫實(shí)現(xiàn)緩釋，無法激活TLR通路，免疫刺激強(qiáng)度弱于CFA。對抗體多樣性的提升作用中等，激活的B細(xì)胞克隆數(shù)量少于CFA，主要集中在優(yōu)勢表位和部分常見稀有表位；對親和力的提升效果也屬于中等水平，親和力成熟的效率低于CFA。
3、鋁鹽佐劑
它通過吸附抗原形成顆粒，促進(jìn)抗原提呈細(xì)胞的攝取，且免疫刺激偏向誘導(dǎo)Th2型免疫應(yīng)答。對抗體多樣性的提升作用較弱，通常只能激活針對抗原優(yōu)勢表位的B細(xì)胞克隆，難以覆蓋稀有表位；誘導(dǎo)的抗體親和力也處于中等偏低水平，整體效果不及弗氏佐劑。
4、免疫刺激復(fù)合物（ISCOM）
這類佐劑可溶解抗原并靶向遞送至樹突狀細(xì)胞，能平衡激活Th1和Th2型免疫應(yīng)答，安全性遠(yuǎn)高于弗氏佐劑。對抗體多樣性的提升作用較高，能有效激活針對優(yōu)勢表位和部分稀有表位的B細(xì)胞克??；親和力成熟的效果接近弗氏完全佐劑，能誘導(dǎo)產(chǎn)生高親和力抗體，是兼顧效果與安全性的優(yōu)選佐劑類型。
三、綜合作用規(guī)律
若要獲得高多樣性、高親和力的多克隆抗體，常用的優(yōu)化方案是基礎(chǔ)免疫用弗氏完全佐劑乳化抗原，后續(xù)2–3次加強(qiáng)免疫用弗氏不完全佐劑乳化抗原，利用CFA的強(qiáng)效激活能力啟動廣譜B細(xì)胞應(yīng)答，再用IFA維持抗原刺激并驅(qū)動親和力成熟。
若對動物福利和安全性要求較高，則可選用免疫刺激復(fù)合物佐劑，配合2次加強(qiáng)免疫，在保證抗體多樣性和親和力的同時，降低佐劑引發(fā)的局部炎癥反應(yīng)。而如果僅使用鋁鹽佐劑且加強(qiáng)次數(shù)不足，得到的抗血清往往多樣性窄、親和力低，僅適用于抗原豐度高的常規(guī)檢測，無法滿足精細(xì)表位識別等高端需求。
