抗體制備公司的質量控制體系如何評估?從免疫原制備到抗體交付
日期:2025-12-26 16:59:35
評估抗體制備公司的質量控制體系,核心是看其全流程質控節點的完整性、檢測方法的科學性、數據的可追溯性,以及是否能匹配抗體的應用場景(如科研、診斷、治療)。從免疫原制備到抗體交付,以下關鍵質控節點必不可少,同時也是評估該公司質控能力的核心依據:
2、免疫原活性/構象驗證
3、雜質控制
二、動物免疫階段的質控節點
2、免疫效價跟蹤檢測
3、抗體特異性初篩
2、純化后抗體純度與濃度檢測
3、雜質殘留檢測
2、抗體效價定量
3、穩定性測試
2、產品一致性驗證
3、使用說明與售后支持
一、免疫原制備階段的質控節點
免疫原的純度、活性和結構正確性,直接決定后續抗體的特異性和效價,是抗體制備的源頭質控。
1、免疫原純度檢測
針對重組蛋白免疫原,需通過SDS-PAGE電泳檢測條帶單一性,通過高效液相色譜(HPLC)或毛細管電泳(CE)定量純度,科研級抗體免疫原純度通常要求≥90%,診斷級需≥95%。
針對多肽免疫原,需通過質譜(MS)驗證分子量與理論值一致,通過反相高效液相色譜(RP-HPLC)檢測純度≥95%,同時確認無截短、錯誤修飾的雜肽。
針對偶聯免疫原(如小分子半抗原偶聯載體蛋白),需檢測偶聯效率和偶聯比,確保半抗原充分暴露且載體蛋白未發生聚合,常用方法為紫外分光光度法或凝膠過濾色譜。
2、免疫原活性/構象驗證
對于具有天然構象的蛋白免疫原,需通過ELISA或表面等離子體共振(SPR)驗證其與已知配體/抗體的結合活性,確保免疫原構象未因純化、凍干等步驟破壞。
凍存前需進行穩定性測試,評估不同溫度、保存條件下免疫原的純度和活性變化,出具穩定性報告。
3、雜質控制
檢測內毒素含量(鱟試劑法),科研級免疫原內毒素需<10EU/mg,診斷/治療級需<1EU/mg;同時檢測宿主蛋白殘留、核酸殘留、重金屬殘留等,避免雜質引發動物免疫副反應或干擾后續抗體檢測。

二、動物免疫階段的質控節點
該階段質控旨在監控免疫應答的有效性和穩定性,避免因免疫方案偏差導致抗體效價不足。
1、免疫動物健康監測
免疫前確認動物(如小鼠、兔、羊)的健康狀況和血清背景,通過預免疫血清檢測排除天然抗體與目標抗原的交叉反應,確保背景值低于設定閾值。
免疫過程中記錄動物的體重、精神狀態、注射部位反應,避免佐劑引發嚴重炎癥或動物死亡,保證免疫過程符合動物福利規范。
2、免疫效價跟蹤檢測
每次加強免疫后3–7天采集抗血清,通過間接ELISA檢測抗體效價(血清稀釋度對應的OD值),明確效價隨免疫次數的變化趨勢。
當效價達到平臺期(連續兩次檢測效價無明顯提升)時,判定為最佳采血時間點,避免過早或過晚采血導致抗體效價/親和力不足。
3、抗體特異性初篩
對中期抗血清進行WesternBlot(WB)或免疫印跡驗證,確認抗體能特異性識別天然/變性狀態下的目標抗原,同時通過競爭抑制ELISA排除非特異性結合。
三、抗體純化與工藝質控節點
抗體純化的核心是去除雜蛋白、血清白蛋白、脂類等雜質,保證抗體的純度和特異性。
1、純化工藝一致性驗證
明確純化方法(如蛋白A/G親和層析、抗原親和層析、離子交換層析),記錄關鍵工藝參數(如上樣流速、洗脫pH、洗脫液濃度),確保批次間工藝參數一致,避免因工藝波動導致抗體質量差異。
2、純化后抗體純度與濃度檢測
用SDS-PAGE(還原/非還原條件)檢測抗體條帶,IgG類抗體應呈現清晰的重鏈(約50kDa)和輕鏈(約25kDa)條帶,無明顯雜帶;通過HPLC定量純度,科研級抗體純度≥90%,診斷級≥95%。
用紫外分光光度法(A280)精確測定抗體濃度,同時校正濁度和核酸干擾,出具濃度標定報告。
3、雜質殘留檢測
檢測宿主血清蛋白殘留(ELISA法)、親和層析配體殘留(如蛋白A殘留,<5ng/mg抗體)、內毒素殘留、防腐劑殘留(如疊氮鈉)等,確保殘留量符合應用場景要求(治療級抗體殘留標準最嚴格)。
四、抗體功能與穩定性質控節點
這是抗體交付前的核心質控環節,直接決定抗體能否滿足客戶的使用需求。
1、抗體特異性驗證
針對不同應用場景設計驗證方案:WB驗證變性抗原結合能力、免疫組化(IHC)/免疫熒光(IF)驗證細胞內天然抗原定位能力、流式細胞術(FCM)驗證細胞膜抗原結合能力、SPR/生物膜干涉技術(BLI)定量抗體與抗原的親和力(KD值)。
進行交叉反應測試,用與目標抗原有同源性的蛋白/多肽進行檢測,確認抗體無明顯交叉反應。
2、抗體效價定量
通過定量ELISA測定抗體的效價,出具效價標準曲線,明確抗體的工作濃度范圍,方便客戶直接使用。
3、穩定性測試
進行加速穩定性試驗(如37℃放置7天、4℃放置1個月)和長期穩定性試驗(-20℃/-80℃凍存6個月),檢測抗體的純度、效價、親和力變化,確保抗體在推薦保存條件下的穩定性。
驗證凍融耐受性,記錄抗體經過多次凍融后的活性變化,給出凍融次數建議。
五、交付階段的質控節點
交付質控的核心是數據完整性和可追溯性,是評估公司質控體系規范性的重要依據。
1、完整質控報告(COA)交付
必須提供分析檢測報告(CertificateofAnalysis,COA),包含上述所有質控節點的檢測方法、原始數據、判定標準和結果,確保每一項指標可追溯。
2、產品一致性驗證
若為批次化生產,需提供批次間一致性數據,證明不同批次抗體的純度、效價、親和力無顯著差異。
3、使用說明與售后支持
提供詳細的抗體保存條件、稀釋方法、適用實驗類型及注意事項;承諾售后技術支持,如抗體使用效果不佳時提供復測或優化建議,這也是質控體系的延伸體現。
4、評估抗體制備公司質控體系的核心維度
質控節點覆蓋度:是否覆蓋從免疫原到交付的全流程,無關鍵環節缺失。
檢測方法科學性:是否采用行業公認的檢測方法,而非僅用單一方法驗證。
數據可追溯性:是否能提供每一步的原始記錄和檢測圖譜,而非僅給出結論。
定制化適配性:是否能根據客戶抗體的應用場景(如IHC專用、治療級)調整質控標準。




