怎么根據(jù)目標(biāo)抗體的應(yīng)用場景（如WB、IP、免疫組化）選擇合適的宿主？
日期：2025-12-19 13:37:25
選擇目標(biāo)抗體的宿主物種，核心是匹配應(yīng)用場景的核心需求（如特異性、結(jié)合力、組織穿透性），同時規(guī)避樣本同源干擾，以下按WB、IP、免疫組化三大場景分別說明，不使用表格形式：
一、WesternBlot（WB）場景
WB的核心需求是條帶清晰、背景低、特異性強(qiáng)，優(yōu)先選擇鼠作為宿主，鼠源單克隆抗體的優(yōu)勢在于能精準(zhǔn)識別單一抗原表位，非特異性結(jié)合少，條帶干凈，非常適合常規(guī)蛋白的定性和定量分析，且商業(yè)化成熟、性價比高。需要注意的是，若檢測的樣本是鼠源組織，要避免使用鼠源抗體，防止內(nèi)源性IgG造成背景條帶干擾。
次選宿主為兔，兔源抗體無論是多抗還是單抗，都具備更廣的抗原識別譜，對種間保守性高的蛋白或低豐度蛋白的檢測靈敏度更高，適合跨物種蛋白分析或微量靶標(biāo)檢測。
二、免疫沉淀（IP）/免疫共沉淀（Co-IP）場景
這類實(shí)驗的核心需求是抗體與抗原結(jié)合力強(qiáng)、沉淀效率高，且不影響抗原構(gòu)象，首選宿主是兔。兔源抗體的Fc段與ProteinA/G的結(jié)合效率優(yōu)于多數(shù)宿主來源抗體，能顯著提升沉淀回收率；同時兔源多抗可識別抗原的多個表位，即便抗原構(gòu)象發(fā)生輕微變化，也能穩(wěn)定結(jié)合，適合常規(guī)IP和Co-IP實(shí)驗。
次選宿主為山羊，山羊源抗體與ProteinG的結(jié)合力極強(qiáng)，背景干擾更低，尤其適合微量抗原的富集實(shí)驗；如果檢測的樣本是鼠、兔源組織，山羊源抗體能有效規(guī)避同源交叉反應(yīng)，降低實(shí)驗背景。
三、免疫組化（IHC）場景
IHC的核心需求是組織穿透性強(qiáng)、定位精準(zhǔn)、背景低，需根據(jù)切片類型區(qū)分選擇：
石蠟切片：優(yōu)先選兔作為宿主。石蠟切片制備過程中抗原表位易被破壞，兔源抗體可識別多個表位，部分表位丟失后仍能結(jié)合靶標(biāo)；且兔源抗體分子量相對較小，組織穿透性更好，適合細(xì)胞內(nèi)抗原的定位檢測，比如臨床病理石蠟樣本的腫瘤標(biāo)志物分析。
冰凍切片：鼠、兔均可。冰凍切片的抗原表位完整，鼠源單抗特異性高，能減少非特異性染色；兔源抗體靈敏度更高，適合低豐度抗原的檢測。
特殊需求場景：可選雞作為宿主。雞源IgY抗體不與哺乳動物的Fc受體結(jié)合，背景極低，適合細(xì)胞膜表面抗原或微量靶標(biāo)的檢測；同時雞源抗體能與鼠、兔源抗體搭配使用，實(shí)現(xiàn)多重染色，避免二抗交叉反應(yīng)。
四、特殊場景的補(bǔ)充選擇
多重染色實(shí)驗：需搭配不同宿主的一抗，比如鼠源單抗+兔源單抗，再分別使用對應(yīng)的抗鼠、抗兔二抗，避免交叉干擾。
流式細(xì)胞術(shù)：優(yōu)先選鼠源單抗，其與流式常用的熒光標(biāo)記試劑兼容性好，特異性高，能減少假陽性結(jié)果。
體內(nèi)實(shí)驗：優(yōu)先選人源化或人鼠嵌合抗體，避免宿主免疫排斥；科研級體內(nèi)實(shí)驗若使用鼠源樣本，可直接選用鼠源抗體，消除同物種排斥問題。
