流式抗體的熒光素標記類型（如 FITC、PE、APC、PerCP）對檢測靈敏度和通道選擇有什么影響？
日期：2025-12-17 09:49:38
流式抗體的熒光素標記類型（FITC、PE、APC、PerCP）會通過熒光亮度、光穩定性、光譜特性三個核心維度，直接影響檢測靈敏度和流式細胞儀的通道選擇，具體差異如下：
一、四種常見熒光素對檢測靈敏度的影響
檢測靈敏度的核心取決于熒光素的亮度（消光系數+量子產率）和抗干擾能力（光穩定性、自發熒光干擾），四種熒光素的靈敏度表現排序為：PE＞APC＞FITC＞PerCP。
1、PE（藻紅蛋白）
靈敏度最高，是常見熒光素中亮度最強的類型。其消光系數大、量子產率高，能產生極強的熒光信號，可輕松區分低表達抗原的弱陽性細胞群與陰性細胞群。
光穩定性較好，不易發生熒光淬滅，檢測過程中信號衰減幅度小，適合長時間或高復雜度的多色實驗。
2、APC（別藻藍蛋白）
2、APC（別藻藍蛋白）
靈敏度次高，亮度略低于PE，但優勢在于自發熒光干擾極小。APC的激發光為633/635nm紅光，樣本（如細胞、組織碎片）在紅光波段的自發熒光本底極低，因此信噪比極高，尤其適合檢測弱表達靶點，或樣本自發熒光較強的實驗（如凋亡細胞、植物細胞）。
光穩定性優異，是多色實驗中“弱信號靶點”的優選熒光素。
3、FITC（異硫氰酸熒光素）
靈敏度中等，亮度遠低于PE和APC，僅適合檢測高表達抗原。
光穩定性較差，易受激發光照射而淬滅，長時間檢測會導致信號衰減；同時其激發光為488nm藍光，樣本在藍光波段的自發熒光干擾相對較高，進一步降低了弱信號的分辨能力。
4、PerCP（多甲藻黃素葉綠素蛋白）
靈敏度最低，亮度弱于前三者，且光穩定性極差，極易淬滅，檢測過程中信號丟失明顯。
其發射光譜較寬，容易與其他熒光素（如APC）產生光譜重疊，導致背景噪音升高，進一步降低靈敏度，僅適合標記高豐度抗原，目前已逐漸被更穩定的串聯熒光素（如PerCP-Cy5.5）替代。
二、四種常見熒光素對通道選擇的影響
通道選擇的核心是熒光素激發波長與激光器匹配、發射波長與濾光片匹配，流式細胞儀的激光器和濾光片配置直接決定了可選用的熒光素類型，具體對應關系如下：
1、FITC
激發波長：488nm（氬離子激光器，流式細胞儀的基礎配置激光器）。
發射波長：約525nm，需匹配FL1通道，對應濾光片通常為530/30nm（允許515~545nm的光通過）。
通道限制：只要儀器配備488nm激光器和FL1通道濾光片，即可使用FITC，適用性廣。
2、PE
激發波長：488nm（與FITC共用488nm激光器）。
發射波長：約575nm，需匹配FL2通道，對應濾光片通常為585/42nm。
通道限制：依賴488nm激光器和FL2通道，是488nm激光器搭配的高亮度熒光素代表。
3、APC
激發波長：633/635nm（氦氖激光器或紅光半導體激光器，中高端流式細胞儀的標配）。
發射波長：約660nm，需匹配FL4通道，對應濾光片通常為660/20nm。
通道限制：必須配備633/635nm激光器，基礎款僅帶488nm激光器的儀器無法使用APC。
4、PerCP
激發波長：488nm（同樣依賴488nm激光器）。
發射波長：約675nm，需匹配FL3通道，對應濾光片通常為670/30nm。
通道限制：雖可在488nm激光器上使用，但因發射光譜寬，易與APC的FL4通道信號重疊，需在多色實驗中嚴格設置熒光補償，否則會干擾檢測結果。
靈敏度優先級：PE（弱靶點首選）＞APC（低自發熒光首選）＞FITC（高靶點常用）＞PerCP（逐漸淘汰）
通道匹配關鍵：先看儀器激光器（488nm/633nm），再匹配對應濾光片通道，無對應激光器則無法使用該熒光素。
