標(biāo)準(zhǔn)的RNA pulldown試劑盒通常包含哪些關(guān)鍵組分？

日期：2025-11-24 14:35:12

RNA pull-down試劑盒的核心作用是捕獲與目標(biāo)RNA相互作用的蛋白質(zhì)，其關(guān)鍵組分圍繞“特異性結(jié)合、反應(yīng)環(huán)境維持、干擾排除、結(jié)果驗(yàn)證”設(shè)計(jì)，不同品牌試劑盒組分略有差異，但核心模塊高度一致，具體如下：

1、核心結(jié)合與捕獲組分

這是實(shí)現(xiàn)RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物捕獲的核心部分。其中最關(guān)鍵的是鏈霉親和素磁珠，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)中常用生物素標(biāo)記目標(biāo)RNA探針，而鏈霉親和素與生物素具有極強(qiáng)的特異性結(jié)合能力，磁珠可借助磁力架快速分離，高效富集結(jié)合了目標(biāo)RNA的蛋白質(zhì)復(fù)合物，試劑盒就配備了核酸適配型鏈霉親和素磁珠。部分試劑盒還會搭配RNA3'端生物素化試劑盒，方便用戶自行對目標(biāo)RNA進(jìn)行生物素標(biāo)記，為后續(xù)結(jié)合磁珠做準(zhǔn)備。

2、反應(yīng)緩沖液體系

該體系用于維持RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合的穩(wěn)定環(huán)境，同時保障后續(xù)洗滌、洗脫等步驟的順利進(jìn)行。常見的有蛋白質(zhì)-RNA結(jié)合緩沖液，其成分通常包含適宜濃度的鹽離子、Tris等，能模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，減少蛋白質(zhì)變性，促進(jìn)RNA與蛋白質(zhì)的特異性結(jié)合，這類緩沖液多為濃縮液，使用時需稀釋；還有洗滌緩沖液，一般會設(shè)計(jì)成特定鹽濃度，既能洗去未特異性結(jié)合的雜蛋白、游離RNA等雜質(zhì)，又不會破壞RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物，部分試劑盒會配備不同鹽濃度的梯度洗滌緩沖液，提升洗滌效果；此外，洗脫緩沖液也不可或缺，比如生物素洗脫緩沖液，可通過競爭結(jié)合等機(jī)制，將捕獲到的RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物從磁珠上高效洗脫下來，以便后續(xù)檢測。部分試劑盒還會額外提供Tris緩沖液，用于緩沖體系的微調(diào)。

3、對照與校準(zhǔn)相關(guān)組分

這類組分用于驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的可靠性，排除假陽性結(jié)果。陽性RNA對照是已知能結(jié)合特定蛋白質(zhì)的RNA，如部分試劑盒中的ARRNA，可用于確認(rèn)實(shí)驗(yàn)流程是否通暢、試劑是否有效；陰性RNA對照則是不會與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合的RNA，如多聚腺苷酸RNA，用于排除非特異性結(jié)合帶來的干擾；部分試劑盒還會搭配特異性抗體，如Thermo試劑盒中的HUR單克隆抗體，可輔助驗(yàn)證捕獲到的蛋白質(zhì)是否為目標(biāo)相互作用蛋白。

4、干擾抑制相關(guān)試劑

其作用是避免RNA降解和蛋白質(zhì)降解，保證實(shí)驗(yàn)樣本的完整性。RNA酶抑制劑是核心試劑之一，能抑制樣本中內(nèi)源性RNA酶的活性，防止目標(biāo)RNA被降解，這是RNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)的必需試劑；同時常配套蛋白酶抑制劑，可抑制細(xì)胞裂解后釋放的蛋白酶對目標(biāo)蛋白質(zhì)的降解，避免因蛋白質(zhì)破壞導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，部分試劑盒會將其配制成濃縮液，使用時按需加入裂解液中。

5、輔助檢測相關(guān)組分

部分試劑盒會附帶少量輔助試劑以銜接后續(xù)檢測步驟。例如SDS-PAGE上樣緩沖液，方便將洗脫后的RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物直接處理后進(jìn)行凝膠電泳，進(jìn)而分離蛋白質(zhì)；還有些會搭配與后續(xù)Western blot檢測適配的基礎(chǔ)試劑，幫助用戶快速驗(yàn)證捕獲到的目標(biāo)蛋白質(zhì)，簡化實(shí)驗(yàn)流程。