樣本的儲存條件對ELISA試劑盒檢測結果的影響是什么，如何制定樣本預處理的標準化流程?
日期：2025-11-18 09:57:42
低溫、短時間儲存且避免反復凍融能最大程度維持樣本中抗原/抗體活性，標準化流程需圍繞“控溫、控時、控凍融”三大核心制定。
一、儲存條件對檢測結果的影響規律
1.溫度的影響
4℃短期儲存（1-3天）：樣本成分較穩定，檢測結果波動小，適合臨時存放。
-20℃儲存（1-3個月）：多數抗原/抗體活性可保留，但部分不穩定成分（如酶類、小分子抗原）可能緩慢降解，導致檢測值偏低。
-80℃儲存（6-12個月）：能長期穩定保存樣本，成分降解速率顯著降低，是長期儲存的首選溫度。
室溫儲存（>2小時）：樣本中蛋白易變性、降解，或出現非特異性結合，導致結果偏高或偏低，且重復性差。
2.儲存時間的影響
儲存時間與檢測結果準確性呈負相關，時間越長，抗原/抗體活性損失越多。
短期儲存（≤1周）：無論4℃還是-20℃，結果偏差通常在可接受范圍（<10%）。
長期儲存（>3個月）：即使-80℃條件下，也可能出現檢測信號減弱，需在結果分析時考慮校正。
3.反復凍融的影響
每一次凍融都會破壞細胞膜和蛋白結構，導致抗原/抗體釋放或變性。
反復凍融≥3次時，檢測值可能下降15%-30%，且離散度增大，是影響結果重復性的主要因素之一。
凍融過程中產生的冰晶還可能引發樣本成分聚集，干擾抗原與抗體的特異性結合。
二、樣本預處理標準化流程制定
1.樣本采集與初步處理
嚴格按照樣本采集規范操作，血清/血漿樣本采集后及時離心分離（2000-3000rpm，10-15分鐘），避免溶血、凝血塊殘留。
腦脊液樣本采集后立即送檢，若需短期存放，直接置于4℃冰箱，無需額外處理。
2.儲存前分裝處理
分離后的樣本按單次檢測用量分裝至無菌凍存管，每管體積匹配ELISA試劑盒的樣本需求量（如50-100μL）。
分裝后快速標注樣本信息、采集日期和凍存次數，避免混淆。
3.分級儲存方案
臨時儲存（≤3天）：4℃冰箱冷藏，密封保存防止揮發和污染。
中期儲存（≤3個月）：-20℃冰箱凍存，放入密封盒中避免溫度波動。
長期儲存（>3個月）：-80℃超低溫冰箱或液氮中儲存，確保溫度穩定在-70℃以下。
4.凍融與復溫操作
樣本使用前從冰箱取出，置于冰上緩慢解凍，或4℃冰箱過夜解凍，禁止室溫快速解凍。
解凍后輕輕顛倒混勻3-5次，避免劇烈振蕩導致蛋白變性。
嚴格限制凍融次數，每管樣本凍融不超過2次，超過則廢棄。
5.質量控制要點
儲存過程中定期抽查樣本，通過檢測已知濃度的標準品或質控品，驗證樣本穩定性。
若樣本出現渾濁、沉淀或溶血加重，需重新評估是否適合檢測。
建立樣本儲存臺賬，記錄每批樣本的儲存條件、時間和使用情況，便于追溯。
