怎么通過Levey-Jennings質控圖監控ELISA試劑盒檢測穩定性?
日期:2025-08-11 16:35:41
Levey-Jennings質控圖(L-J 圖)是臨床實驗室常用的質控工具,通過連續監測質控品的檢測結果,判斷檢測系統(包括 ELISA 試劑盒、儀器、操作等)是否處于穩定狀態。對于 ELISA 試劑盒,其檢測過程涉及抗原 - 抗體結合、酶催化反應等多個步驟,易受試劑穩定性、操作誤差、儀器波動等影響,因此需通過 L-J 圖監控其檢測穩定性。具體方法如下:
一、核心原理
L-J 圖以質控品的檢測值(OD值)為縱軸,檢測批次/時間為橫軸,通過預設的 “中心線”(均值)和 “控制限”(標準差范圍),直觀展示質控結果的波動趨勢。若結果在控制限內且無異常趨勢,說明ELISA檢測系統穩定;反之則提示存在誤差(隨機或系統誤差),需干預。

二、步驟:如何用 L-J 圖監控 ELISA 穩定性
1. 選擇合適的ELISA質控品
質控品是監控的核心,需滿足:
基質匹配:與 ELISA 檢測的樣本基質一致(如血清、血漿),避免基質效應干擾;
濃度覆蓋:至少包含高、中、低3個濃度(覆蓋試劑盒的檢測范圍,尤其是臨床決策點附近);
穩定性好:與 ELISA 試劑盒同條件保存(如 4℃、-20℃),且在有效期內穩定,避免因質控品自身降解導致結果偏差;
均一性高:同一批次質控品的分裝差異小(批內CV<5%)。
2. 確定L-J圖的關鍵參數(均值 X 和標準差 SD)
初始需通過多次檢測確定質控品的 “預期值范圍”,作為質控圖的基準:
檢測次數:至少檢測20 個獨立批次(每批次按ELISA標準操作檢測質控品,記錄 OD值);
計算均值(X)和標準差(SD):
均值X=所有批次質控品OD值的平均值(反映質控品的 “靶值”);
標準差SD=反映檢測結果的離散程度(批間變異);
設定控制限:
通常以X±2SD作為警告限,X±3SD作為失控限(95% 的正常結果應在X±2SD內,99.7%在X±3SD內)。
3. 繪制 Levey-Jennings 質控圖
橫軸:檢測批次(如第 1 批、第 2 批…)或時間(如日期);
縱軸:質控品的OD值;
標注關鍵線:
中心線(CL):X;
警告限(WL):X±2SD(通常用黃色線);
失控限(AL):X±3SD(通常用紅色線)。
4. 日常監控:記錄并分析質控結果
每次使用 ELISA 試劑盒檢測時,需同步檢測質控品(與樣本同板、同操作步驟),將質控品的OD值點入 L-J 圖中,按以下規則判斷穩定性:
(1)判斷 “在控”:檢測系統穩定
所有質控品OD值均在 X±2SD 內;
無明顯趨勢(如連續 5 點遞增 / 遞減)或偏移(如突然整體升高 / 降低)。
(2)判斷 “警告”:需警惕潛在誤差
出現12s 規則:1 個質控點超出 X±2SD(但在 X±3SD 內)。
此時需檢查:是否為偶然誤差(如加樣量偏差)、操作是否規范(如洗滌不充分)、試劑是否新鮮(如底物變質)等,無需立即停止檢測,但需加強下一批次監控。
(3)判斷 “失控”:檢測系統不穩定,需干預
若出現以下情況,提示 ELISA 檢測系統存在系統誤差(如試劑失效、儀器故障)或嚴重隨機誤差,需暫停檢測并排查原因:
13s 規則:1 個質控點超出 X±3SD(如高濃度質控品 OD 值突然遠高于 X+3SD,可能因底物過量或酶結合物污染);
22s 規則:連續 2 個質控點超出同一側 X±2SD(如中濃度質控品連續 2 批 OD 值低于 X-2SD,可能因抗體活性下降);
R4s 規則:同一批次高、低濃度質控品的差值超出 4SD(如高濃度遠高于 X+2SD,低濃度遠低于 X-2SD,提示操作步驟混亂);
趨勢性變化:連續 5 個以上質控點呈遞增 / 遞減(如低濃度質控品 OD 值逐批降低,可能因包被板抗體降解);
偏移性變化:質控點突然整體向一側偏移(如所有濃度質控品 OD 值均較之前升高,可能因孵育時間過長)。
5. 失控后的處理:恢復 ELISA 檢測穩定性
一旦失控,需按以下步驟排查并糾正:
立即重復檢測:用新的質控品復孔檢測,排除質控品分裝誤差或偶然操作失誤;
排查誤差來源(結合 ELISA 操作特點):
試劑問題:試劑盒是否過期(如酶結合物失活)、試劑是否變質(如底物渾濁、抗體沉淀)、稀釋液是否污染;
操作問題:洗滌是否充分(殘留酶結合物導致背景升高)、加樣量是否準確(移液器校準失效)、孵育溫度 / 時間是否合規(如 37℃孵育超時導致非特異性結合增加);
儀器問題:酶標儀是否校準(波長偏差導致 OD 值不準)、孵育箱溫度是否穩定;
糾正后驗證:排除原因后,重新檢測質控品,若結果回歸控制限內,方可繼續使用 ELISA 試劑盒;若反復失控,需更換試劑盒批次或品牌。
三、注意事項
定期更新質控參數:每 6 個月或檢測 50 批次后,重新計算 X 和 SD(剔除失控值),避免因試劑批次變化導致參數過時;
同時監控多濃度質控品:單一濃度可能無法反映全檢測范圍的穩定性(如低濃度失控可能因試劑靈敏度下降);
結合 ELISA 特性分析:例如,若空白孔 OD 值升高伴隨質控品 OD 值異常,可能因洗滌不充分或底物污染。
通過 Levey-Jennings 質控圖,可直觀捕捉 ELISA 檢測過程中的微小波動,及時發現試劑失效、操作偏差等問題,從而保證檢測結果的可靠性和穩定性。





