elisa實(shí)驗(yàn)原理及步驟
日期：2023-07-17 16:31:19
ELISA免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)用于檢測生物樣品中特定分子（如抗原或抗體）的存在和濃度。下面是ELISA實(shí)驗(yàn)的基本原理和步驟：
ELISA實(shí)驗(yàn)步驟：
ELISA實(shí)驗(yàn)原理：
具體來說，ELISA利用抗原與抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)進(jìn)行檢測。通常，抗原會被吸附在固相載體上，如微孔板表面。
在檢測樣品中，如果包含與抗原相對應(yīng)的抗體，它們會與固定在載體上的抗原發(fā)生結(jié)合。
隨后，通過添加輔助抗體（通常是與酶結(jié)合的抗體），與已結(jié)合的抗體結(jié)合形成復(fù)合物。
最后，通過添加酶底物，酶會催化底物的反應(yīng)產(chǎn)生可測量的信號，如顏色變化。
ELISA實(shí)驗(yàn)步驟：
準(zhǔn)備樣品：收集需要檢測的樣品，如血清、細(xì)胞上清液等，并進(jìn)行必要的預(yù)處理，如稀釋或加入試劑。
板涂抗原：將具有已知抗原性的溶液加入到微孔板中，使其吸附在孔底。
阻斷：通過添加適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)（如牛血清蛋白、BSA）來阻斷未被吸附的孔位，減少非特異性結(jié)合。
加入樣品和對照：將待測樣品和已知濃度的對照樣品加入不同的孔中，通常進(jìn)行多個重復(fù)。
孵育：將板子封閉，并在適當(dāng)?shù)臈l件下（如溫度和時間）使抗原與樣品中的抗體發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。
洗滌：將孔中的液體廢棄，然后用緩沖液洗滌孔位，以去除未結(jié)合的物質(zhì)。
添加檢測抗體：加入與特定抗原或抗體結(jié)合的酶標(biāo)記抗體，并充分孵育。
再次洗滌：洗滌掉未結(jié)合的酶標(biāo)記抗體。
加入底物：加入一個與酶標(biāo)記相關(guān)的底物，例如TMB（3,3',5,5'-四甲基苯基二乙基苯并噻唑啉-2,2'-聯(lián)苯胺）。
反應(yīng)停止：通過加入適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)停止劑（如硫酸等），停止底物的反應(yīng)。
讀取結(jié)果：使用光度計等儀器，測量底物反應(yīng)產(chǎn)生的信號的強(qiáng)度，并將其與標(biāo)準(zhǔn)曲線或?qū)φ諛悠愤M(jìn)行比較，以確定待測樣品中的目標(biāo)分子的濃度。
這些步驟是一般ELISA實(shí)驗(yàn)的基本流程，具體步驟可能會因不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒖乖?抗體類型和試劑盒品牌而有所差異。在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)之前，建議參考相關(guān)實(shí)驗(yàn)室手冊、文獻(xiàn)以及試劑的說明書，以確保正確而可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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