酵母雙雜交篩選互作蛋白
日期：2023-03-29 10:45:23
酵母雙雜交（Y2H）是一種常用的蛋白質(zhì)相互作用篩選技術(shù)，可用于鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系。其基本原理是將兩個蛋白質(zhì)分別融合到兩個不同的轉(zhuǎn)錄激活子（DNA結(jié)合區(qū)和激活區(qū)）中，當(dāng)兩個融合蛋白質(zhì)相互作用時，轉(zhuǎn)錄激活子得以重組，使報告基因表達(dá)。
在酵母雙雜交篩選互作蛋白的過程中，一般分為以下步驟：
構(gòu)建融合蛋白質(zhì)的表達(dá)載體：首先需要構(gòu)建兩個表達(dá)融合蛋白質(zhì)的質(zhì)粒，每個質(zhì)粒含有一個轉(zhuǎn)錄激活子和一個融合基因。其中一個質(zhì)粒中搭載“魚叉”（bait）融合基因，另一個質(zhì)粒中搭載“獵物”（prey）融合基因。
酵母雙雜交：將兩種表達(dá)融合蛋白質(zhì)的酵母菌株進行交叉配對，使bait融合蛋白質(zhì)與prey融合蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用，形成一個復(fù)合物。
篩選：通過對生長培養(yǎng)基的篩選，篩選出能夠生長和表達(dá)報告基因的菌落。
驗證：對所得陽性菌落進行鑒定和驗證，包括測序和再次雙雜交驗證。
通過酵母雙雜交技術(shù)，可以鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系，進而揭示蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的功能和調(diào)控機制，為生物學(xué)研究提供了重要的工具。
在酵母雙雜交篩選互作蛋白的過程中，一般分為以下步驟：
構(gòu)建融合蛋白質(zhì)的表達(dá)載體：首先需要構(gòu)建兩個表達(dá)融合蛋白質(zhì)的質(zhì)粒，每個質(zhì)粒含有一個轉(zhuǎn)錄激活子和一個融合基因。其中一個質(zhì)粒中搭載“魚叉”（bait）融合基因，另一個質(zhì)粒中搭載“獵物”（prey）融合基因。
酵母雙雜交：將兩種表達(dá)融合蛋白質(zhì)的酵母菌株進行交叉配對，使bait融合蛋白質(zhì)與prey融合蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用，形成一個復(fù)合物。
篩選：通過對生長培養(yǎng)基的篩選，篩選出能夠生長和表達(dá)報告基因的菌落。
驗證：對所得陽性菌落進行鑒定和驗證，包括測序和再次雙雜交驗證。
通過酵母雙雜交技術(shù)，可以鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系，進而揭示蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的功能和調(diào)控機制，為生物學(xué)研究提供了重要的工具。
