標(biāo)簽內(nèi)參抗體能否用于免疫沉淀（IP）實(shí)驗(yàn)，需注意哪些條件？
日期：2025-12-03 10:15:18
標(biāo)簽內(nèi)參抗體可以用于免疫沉淀（IP）實(shí)驗(yàn)，但需滿足特定的抗體特性和實(shí)驗(yàn)條件，同時(shí)要規(guī)避一些關(guān)鍵風(fēng)險(xiǎn)，具體如下：
1、能否用于IP實(shí)驗(yàn)的核心前提
標(biāo)簽內(nèi)參抗體能否用于IP，首要取決于抗體的抗原結(jié)合表位及交聯(lián)方式：
若抗體識(shí)別的標(biāo)簽表位（如His、Myc、Flag、HA等）在靶蛋白上呈暴露狀態(tài)，且抗體的可變區(qū)能在非變性/變性條件下穩(wěn)定結(jié)合表位，即可用于IP；
需優(yōu)先選擇經(jīng)IP驗(yàn)證的商品化標(biāo)簽內(nèi)參抗體，這類(lèi)抗體的說(shuō)明書(shū)會(huì)明確標(biāo)注“適用于IP”，其Fc段或其他區(qū)域已做優(yōu)化，避免非特異性結(jié)合或影響抗原-抗體復(fù)合物的沉淀。
2、實(shí)驗(yàn)中需注意的關(guān)鍵條件
（1）抗體的選擇與預(yù)處理
避免使用僅適用于WB的標(biāo)簽抗體，這類(lèi)抗體多為識(shí)別變性表位的多抗/單抗，在天然構(gòu)象下結(jié)合能力弱，無(wú)法有效沉淀靶蛋白；
若使用自制抗體，需提前通過(guò)ProteinA/G/L親和柱純化IgG組分，去除血清雜蛋白，減少非特異性沉淀。
（2）裂解液與緩沖體系
需使用溫和的非變性裂解液（如含1%NP-40、0.5%TritonX-100的裂解液），避免強(qiáng)變性劑（如SDS）和高鹽濃度，防止靶蛋白構(gòu)象破壞或標(biāo)簽表位遮蔽，同時(shí)保護(hù)抗體-抗原復(fù)合物的穩(wěn)定性；
裂解液中需添加蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑（若靶蛋白為磷酸化蛋白），防止靶蛋白降解或修飾位點(diǎn)丟失。
（3）沉淀載體的適配性
需選擇與抗體Fc段匹配的沉淀載體，如鼠源單抗用ProteinGbeads，兔源多抗用ProteinAbeads，也可使用偶聯(lián)抗標(biāo)簽抗體的親和beads（如Anti-FlagM2beads），提升沉淀效率；
實(shí)驗(yàn)前需用裂解液充分洗滌beads，去除載體自身的雜蛋白，降低背景污染。
（4）特異性與對(duì)照設(shè)置
必須設(shè)置陰性對(duì)照：包括無(wú)抗體的beads對(duì)照、正常IgG對(duì)照、無(wú)靶蛋白的細(xì)胞裂解液對(duì)照，用于排除非特異性結(jié)合；
若靶蛋白為融合蛋白，需設(shè)置僅含標(biāo)簽的空載載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞的裂解液對(duì)照，驗(yàn)證抗體對(duì)標(biāo)簽的特異性。
（5）洗脫與后續(xù)檢測(cè)
洗脫時(shí)可選擇溫和洗脫方式（如酸性洗脫液pH2.5~3.0、標(biāo)簽肽競(jìng)爭(zhēng)洗脫），避免強(qiáng)洗脫條件導(dǎo)致抗體和靶蛋白變性，影響后續(xù)WB驗(yàn)證；
洗脫后需及時(shí)中和酸性洗脫液，或通過(guò)透析去除標(biāo)簽肽，保證靶蛋白的活性和檢測(cè)準(zhǔn)確性。
