使用ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，洗滌步驟為什么不能省略？
日期：2025-10-30 14:10:26
洗滌步驟是ELISA實(shí)驗(yàn)中消除干擾、保證結(jié)果特異性的核心環(huán)節(jié)，完全不能省略。其核心作用是去除反應(yīng)體系中未結(jié)合的物質(zhì)，避免這些物質(zhì)對(duì)后續(xù)檢測(cè)產(chǎn)生非特異性干擾，最終確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
1.去除未結(jié)合的抗體/抗原，避免假陽(yáng)性
在ELISA的孵育過程中（如加一抗、二抗后），體系內(nèi)會(huì)存在大量未與固相載體（酶標(biāo)板）結(jié)合的游離抗體或抗原。
若不洗滌直接進(jìn)入下一步，這些游離物質(zhì)會(huì)留在板孔中，后續(xù)與底物反應(yīng)時(shí)可能產(chǎn)生非特異性信號(hào)，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性，無法區(qū)分真實(shí)結(jié)合與游離干擾。
2.降低背景信號(hào)，提升結(jié)果靈敏度
封閉步驟后，板孔表面仍可能殘留少量未被封閉的位點(diǎn)，或存在非特異性吸附的雜質(zhì)、試劑成分（如封閉液中的蛋白、稀釋液成分）。
洗滌能將這些物質(zhì)沖洗掉，減少它們與酶標(biāo)記物或底物的非特異性反應(yīng)，從而降低整個(gè)檢測(cè)的背景信號(hào)。背景信號(hào)越低，真實(shí)陽(yáng)性信號(hào)越容易被準(zhǔn)確識(shí)別，實(shí)驗(yàn)的靈敏度也會(huì)隨之提升。
3.保證反應(yīng)體系均一，維持檢測(cè)穩(wěn)定性
每一步孵育后，板孔內(nèi)的反應(yīng)液成分（如抗體濃度、緩沖液比例）可能存在差異，且可能殘留前一步的試劑。
洗滌過程會(huì)用統(tǒng)一的洗滌液（如含吐溫的PBS）沖洗板孔，既能去除殘留試劑，又能使每個(gè)板孔的反應(yīng)環(huán)境保持一致，避免因體系不均一導(dǎo)致的結(jié)果波動(dòng)，保證平行樣本檢測(cè)的穩(wěn)定性。
