檢測低濃度細胞因子時，選擇ELISA試劑盒應優先比較“靈敏度”還是“最低檢測限”，二者的定義和檢測邏輯有何不同？
日期：2025-10-15 11:35:08
在檢測pg/mL級別低濃度細胞因子時，選擇ELISA試劑盒應優先比較靈敏度。因為靈敏度更貼近實際實驗場景下的檢測能力，而最低檢測限多是理想條件下的理論值，在復雜樣本中可能無法達到。
一、核心定義：本質不同，適用場景有別
靈敏度（Sensitivity）：指試劑盒能可靠區分目標物濃度變化的最小能力，通常以“檢測下限（LimitofDetection,LOD）”的實際驗證值體現。它不僅關注“能否檢測到”，更強調“檢測結果是否穩定可信”，會受試劑特異性、樣本背景信號等實際因素影響。
最低檢測限（MinimumDetectableDose,MDD）：指試劑盒理論上能檢測到的目標物最低濃度，一般由廠家通過檢測空白緩沖液的3倍標準差計算得出。它僅反映理想狀態下的“理論檢出下限”，未考慮樣本基質（如血清、細胞上清）中的干擾物質，實際參考價值有限。
二、檢測邏輯：實際驗證vs理論計算
1.靈敏度的檢測邏輯：貼近真實實驗
廠家會用標準品進行梯度稀釋（如0pg/mL、1pg/mL、2pg/mL等），模擬不同濃度的目標物樣本。
通過檢測各梯度的信號值，計算“信號值/空白信號值（S/N）”，通常將S/N≥3時對應的濃度定為實際檢測下限。
部分嚴謹廠家還會用實際樣本基質（如待檢測的血清或細胞上清）添加低濃度標準品，驗證基質是否影響檢測效果，最終結果更符合后續實驗的實際情況。
2.最低檢測限的檢測邏輯：基于理想條件
僅使用不含目標物的緩沖液作為空白樣本，反復檢測（如20次），計算空白信號的平均值和標準差（SD）。
通過公式“最低檢測限=空白均值+3×SD”計算得出，整個過程未使用標準品驗證信號響應，也未涉及任何復雜樣本基質。
這種計算方式忽略了實際樣本中可能存在的干擾物質（如非特異性結合蛋白），導致其理論值往往低于實際檢測能達到的下限，參考意義較弱。
三、選擇建議：3個實操判斷要點
優先看靈敏度的標注形式，首選明確標注“實際檢測下限（LOD）：XXpg/mL”且附帶標準曲線的產品，而非僅標注“最低檢測限（MDD）”的產品。若標注中包含“在血清/細胞上清中檢測靈敏度為XXpg/mL”，說明經過樣本基質驗證，更值得優先考慮。
關注批內/批間變異系數（CV），低濃度檢測對重復性要求極高。即使靈敏度達標，若批內CV＞10%或批間CV＞15%，也可能導致檢測結果波動大，無法準確判斷低濃度差異，需優先選擇CV值更低的試劑盒。
確認特異性驗證數據，細胞因子家族常存在同源性（如IL-6與其他IL-6家族因子），若試劑盒交叉反應率高，會誤將其他物質的信號計入，導致“假陽性高濃度”，掩蓋真實的低濃度信號。需選擇廠家提供交叉反應列表，且對目標因子特異性＞95%的產品。
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