細胞因子測定試劑盒原理
日期:2023-06-12 14:35:26
細胞因子是免疫系統中一類重要的細胞間通訊蛋白,也稱為生長因子、淋巴因子等,參與調控機體的免疫反應和炎癥反應等生理過程。測量細胞因子的水平,能夠了解免疫系統的狀態,并判斷是否存在炎癥反應。現有多種測定細胞因子水平的試劑盒,本文將著重介紹細胞因子檢測試劑盒的原理和操作流程。
一、試劑盒原理
細胞因子elisa檢測試劑盒的原理基于酶聯免疫吸附法(ELISA)或發光酶聯免疫吸附法(ECLIA)技術。主要包括三個步驟:捕獲抗體固定在微孔板上、標記抗體將測量標準品或樣本中的目標細胞因子檢測出來、顯色底物反應出目標蛋白。其詳細測定流程如下:
1、準備試劑和樣本
根據試劑盒說明書的要求,準備好所需的樣本及試劑。樣本可以是血液、血清、腦脊液、胸腔積液等。不同樣本需進行不同的預處理。同時,需要注意試劑的儲存條件和使用壽命。
2、將捕獲抗體固定在微孔板上
將微孔板吸頭上的捕獲抗體加入到微孔板的孔中,靜置一段時間,讓捕獲抗體吸附在孔壁上。通常情況下,微孔板上的抗原可以是多個特異性的細胞因子捕獲抗體或多個不同種類的細胞因子捕獲抗體的混合。
3、添加標記抗體
加入標記抗體,標記抗體會與孔中被吸附的細胞因子形成復合物。該標記抗體通常是帶有酶標記(如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等)或熒光標記的二抗。待標記抗體與目標蛋白相結合后,洗滌掉未結合的雜質。
4、顯色底物反應
加入顯色底物,如TMB底物,使這些復合物發生顏色變化。通過比色或酶促發光系統,檢測復合物中的酶活性或熒光信號,從而測定細胞因子的含量。
二、操作流程
1、實驗前準備
a、按照試劑盒說明書的要求解凍和保存樣本。
b、將微孔板擺放在支架上,將捕獲抗體加入到孔中,并封閉蓋膜,避免空氣污染。
c、準備必要的實驗器材和試劑,如洗滌緩沖液、標記抗體、顯色底物、止反劑等。
2、加樣
將標準品及待測樣本加入到微孔中,通常每個孔可加入50-100μl的樣品。添加標記抗體并孵育后,使用洗滌緩沖液清洗孔中的雜質。
3、加底物顯色
加入顯色底物,產生顏色反應。反應一段時間后,停止反應,加入止反劑以停止顯色過程,防止底物進一步分解。
4、測定OD值
將微孔板放入酶標儀或熒光分析儀中,測定各個孔的OD值或FLU值,并依據標準曲線計算出目標物質的濃度。
三、優缺點
優點:細胞因子elisa檢測試劑盒具有靈敏度高、特異性好、操作簡單、多重測試功能強等優點。它可以同時測定多種細胞因子的水平,并且可分別測定不同樣本中的不同細胞因子,具有較高的應用價值。
缺點: 一些細胞因子在樣本處理和保存過程中會被破壞或丟失,導致檢測結果不準確。此外,有一些影響結果的因素,如反應溫度、時間、底物的含量等,需要經過嚴密控制和標準化操作。
細胞因子檢測試劑盒是一種常用的檢測細胞因子水平的實驗方法,其原理基于ELISA或ECLIA技術。任何一種試劑盒的選擇和使用都需要仔細閱讀說明書,并根據實驗要求進行操作。
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