流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的研究進(jìn)展

日期：2023-06-16 14:09:14

流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry）是一種高通量細(xì)胞分析技術(shù)，已經(jīng)成為了現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究和臨床應(yīng)用中的重要手段之一。流式細(xì)胞術(shù)可以同時(shí)檢測(cè)上千個(gè)單元素水平的指標(biāo)，并可精確測(cè)定每一個(gè)細(xì)胞亞群中各種細(xì)胞指標(biāo)含量的定量分析方法，在細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)等領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用。在細(xì)胞免疫學(xué)領(lǐng)域中，流式細(xì)胞術(shù)也被廣泛應(yīng)用于研究細(xì)胞內(nèi)和外的蛋白質(zhì)、DNA、RNA、小分子化合物等的表達(dá)、定位及變化。

細(xì)胞因子是一類(lèi)由活化的免疫細(xì)胞及其他細(xì)胞產(chǎn)生的多肽分子，能夠調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)中細(xì)胞的增殖、分化、功能和毒性。在免疫學(xué)和炎癥學(xué)研究中，細(xì)胞因子的檢測(cè)是非常重要的工作之一。目前，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞因子的檢測(cè)已成為研究細(xì)胞免疫學(xué)、炎癥學(xué)、腫瘤學(xué)等領(lǐng)域中一個(gè)非常重要的手段。以下將對(duì)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的研究進(jìn)展進(jìn)行介紹。

一、細(xì)胞因子檢測(cè)原理

目前常用的細(xì)胞因子檢測(cè)方法主要包括ELISA、免疫印跡、生物芯片、流式細(xì)胞術(shù)等。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子與其他檢測(cè)方法不同，它可以同時(shí)檢測(cè)多種不同類(lèi)型的細(xì)胞因子，并且可以確定每個(gè)單個(gè)檢測(cè)對(duì)象的定量值。

在流式細(xì)胞術(shù)的檢測(cè)中，一般采用間接免疫熒光法。首先，使用單克隆抗體或多克隆抗體與待測(cè)細(xì)胞因子特異抗體結(jié)合，芯片上的熒光素標(biāo)記單克隆抗體或多克隆抗體與前述結(jié)合生成的免疫復(fù)合物結(jié)合，以便檢測(cè)細(xì)胞因子的存在。流式細(xì)胞術(shù)可對(duì)單個(gè)細(xì)胞或多個(gè)細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，因而對(duì)于細(xì)胞因子的分析有很大的優(yōu)勢(shì)。

二、細(xì)胞因子檢測(cè)的流程

在流式細(xì)胞術(shù)中，細(xì)胞因子的檢測(cè)一般分為以下流程：

1.樣品準(zhǔn)備：包括細(xì)胞損傷、制備單細(xì)胞懸液、細(xì)胞計(jì)數(shù)和調(diào)整細(xì)胞濃度等步驟。

2.細(xì)胞因子染色：使用熒光素標(biāo)記的特異性單克隆抗體或多克隆抗體染色。

3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)：將染色后的樣品送入流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)激光器的激發(fā)和檢測(cè)系統(tǒng)的采集獲得樣品的信號(hào)，進(jìn)而獲得各種細(xì)胞因子的含量及其在不同細(xì)胞亞群中的表達(dá)情況。

三、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù)的改進(jìn)

為了提高流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的敏感度和特異性，前人做了很多的技術(shù)改進(jìn)工作。下面簡(jiǎn)要介紹幾種常見(jiàn)的改進(jìn)技術(shù)：

1、共沉淀技術(shù)
該技術(shù)主要是用于細(xì)胞因子在數(shù)量級(jí)上比較少的小型靶細(xì)胞中的檢測(cè)，因?yàn)樵谶@種情況下，細(xì)胞因子對(duì)于固相或溶液測(cè)定來(lái)說(shuō)可能會(huì)被稀釋到無(wú)法檢測(cè)的程度。使用共沉淀技術(shù)，可提高細(xì)胞因子濃度，使其得以檢測(cè)。

2、免疫結(jié)合酶標(biāo)記試驗(yàn)（IC-ELISA）
IC-ELISA是一種高通量的蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)，可通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的蛋白質(zhì)，在細(xì)胞水平上研究免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。IC-ELISA技術(shù)利用化學(xué)發(fā)光和熒光方法來(lái)檢測(cè)特定蛋白質(zhì)。在細(xì)胞因子檢測(cè)中，IC-ELISA可以通過(guò)捕獲特異性抗體來(lái)檢測(cè)目標(biāo)細(xì)胞因子，以獲得高靈敏度和特異性的結(jié)果。

3、細(xì)胞因子多色流式細(xì)胞術(shù)
細(xì)胞多色流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)是一種同時(shí)檢測(cè)多個(gè)分子的技術(shù)。該技術(shù)通過(guò)光譜區(qū)分不同熒光染料并在單個(gè)細(xì)胞上進(jìn)行多達(dá)17個(gè)標(biāo)簽的熒光染色。多色流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)可以檢測(cè)多種分子，如不同的細(xì)胞因子、細(xì)胞表面分子、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子等。引入多色流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)可以同時(shí)評(píng)估多種分子和細(xì)胞類(lèi)型在復(fù)雜環(huán)境下的相互作用，從而更好地理解并預(yù)測(cè)生物學(xué)過(guò)程的發(fā)生。

四、應(yīng)用前景

隨著技術(shù)的不斷改進(jìn)，流式細(xì)胞術(shù)對(duì)于細(xì)胞因子的檢測(cè)將會(huì)更加快速和高效。同時(shí)，在臨床實(shí)踐中，流式細(xì)胞術(shù)的作用將越來(lái)越重要。例如，在癌癥治療方面，流式細(xì)胞術(shù)已被廣泛應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)和定量，以幫助臨床醫(yī)生選擇最佳化療方案。此外，流式細(xì)胞術(shù)也可以提供有效的參考數(shù)據(jù)，以指導(dǎo)生物藥物制劑的開(kāi)發(fā)和優(yōu)化。今后，我們還可以期待流式細(xì)胞術(shù)在生物技術(shù)和藥物開(kāi)發(fā)領(lǐng)域的更廣泛應(yīng)用，以提高細(xì)胞因子檢測(cè)的敏感度和可靠性，從而推動(dòng)生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)的發(fā)展。