無標簽蛋白純化的技術挑戰與解決方案?
日期:2025-05-16 14:05:12
挑戰:缺乏特異性結合標簽,依賴蛋白天然特性(如電荷、疏水基團、配體結合能力)。
解決方案:
免疫親和層析:利用特異性抗體(如 Anti-Flag 抗體偶聯磁珠),適用于已知表位的蛋白。
金屬螯合層析:利用蛋白表面天然組氨酸簇(如天然 His-rich 區域),需預實驗驗證結合力。
共價層析:通過巰基 - 二硫鍵交換捕獲含半胱氨酸的蛋白(如硫氧還蛋白)。
關鍵:標簽切除酶(如 TEV 蛋白酶)需通過 SEC 去除,殘留量<0.05%。
上一篇: 蛋白純化的最高純度能達到多少,怎么驗證?
下一篇: 怎么確保純化蛋白的生物活性?