酵母三雜交技術實驗原理
日期：2023-07-13 16:13:57
酵母三雜交技術（yeast three-hybrid, Y3H）是常用的分子生物學實驗方法，用于研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。它基于酵母細胞中的轉錄激活因子（transcriptional activator）的特性，通過檢測目標蛋白質(zhì)與其他蛋白質(zhì)的相互作用來篩選相互作用伴侶。
檢測報告基因的表達：
結果分析：
以下是酵母三雜交技術的實驗原理步驟：
構建酵母菌株：
構建一個酵母菌株，其中包含兩個可表達靶蛋白（target protein）和激活域（activation domain）的融合蛋白。這些融合蛋白通過基因工程方法將其編碼序列與適當?shù)谋磉_元件結合在一起。
酵母菌株中也含有一個報告基因（reporter gene），它的啟動子區(qū)域包含識別序列（binding site）。這個識別序列可以被激活域識別并結合。
共表達被檢測蛋白與靶蛋白：
引入第三個外源基因，這個基因編碼一個與被檢測蛋白（bait protein）相互作用的蛋白質(zhì)（prey protein）。這個蛋白質(zhì)會與靶蛋白形成復合物。
靶蛋白和激活域的融合蛋白同時表達，形成復合物。
檢測報告基因的表達：
如果被檢測蛋白與靶蛋白相互作用，它們會結合并促使激活域與識別序列結合，從而激活報告基因的轉錄和表達。
報告基因可以是編碼可觀察性標記物的基因，如熒光蛋白基因，或者編碼對酵母細胞存活有影響的基因。
結果分析：
觀察報告基因的表達情況，如果報告基因表達增加，則說明被檢測蛋白與靶蛋白發(fā)生相互作用。
可以通過熒光顯微鏡觀察細胞中的熒光信號，或者通過其他方法測定報告基因產(chǎn)物的量。
通過酵母三雜交技術，研究人員可以篩選出與目標蛋白質(zhì)相互作用的結合伴侶蛋白，以進一步研究它們在細胞中的生物學功能和信號傳導途徑。
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