酵母雙雜交系統(tǒng)研究蛋白質(zhì)相互作用的方法
日期：2023-06-07 14:05:46
酵母雙雜交系統(tǒng)是研究蛋白質(zhì)相互作用的方法，它利用酵母細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域來檢測蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)相互作用。
酵母雙雜交系統(tǒng)的基本原理是利用酵母雙雜交鑒定（Y2H）法進行篩選。該方法利用酵母細胞中的兩個分子，一個稱為“魚鉤”，它需要連接到目標蛋白質(zhì)的N末端，另一個稱為“誘餌”，它需要連接到目標蛋白質(zhì)的C末端。當魚鉤和誘餌連接時，它們會組成一個轉(zhuǎn)錄激活因子的功能性域，從而激活一些下游基因的轉(zhuǎn)錄。
酵母雙雜交系統(tǒng)研究蛋白互作步驟如下：
1、構(gòu)建酵母表達載體：將誘餌基因和魚鉤基因克隆到不同的酵母表達載體中。
2、轉(zhuǎn)化酵母細胞：將誘餌表達載體和魚鉤表達載體同時轉(zhuǎn)化到同一株酵母細胞內(nèi)。
3、篩選陽性菌落：在選擇培養(yǎng)基上生長細胞，檢測是否出現(xiàn)了青白色小菌落。
4、鑒定蛋白質(zhì)相互作用：通過對篩選出的菌落進行進一步的測試和驗證，確定哪些蛋白質(zhì)相互作用。
酵母雙雜交系統(tǒng)有許多優(yōu)點：
1、快速：該方法能夠快速、高通量地篩選蛋白質(zhì)相互作用。
2、靈敏：檢測蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)交互作用所需的電信號很小，因此酵母雙雜交系統(tǒng)通常能夠檢測到相互作用的形成。
3、特異性：酵母雙雜交系統(tǒng)能夠特異地識別蛋白質(zhì)相互作用，避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。
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