雙特異性抗體的制備方法有哪些？

日期：2023-05-22 15:02:13

雙特異性抗體（bispecific antibody, BsAb）能同時結(jié)合兩種不同抗原，并促進(jìn)它們的相互作用從而實現(xiàn)某種生物學(xué)效應(yīng)的抗體分子。與傳統(tǒng)單克隆抗體相比，雙特異性抗體在治療腫瘤、感染等疾病方面具有顯著的優(yōu)勢。目前，已經(jīng)開發(fā)出多種制備雙特異性抗體的方法，下面介紹其中一些常見的方法。

1、隨機(jī)雜交法

隨機(jī)雜交法是利用人工構(gòu)建的DNA庫進(jìn)行大規(guī)模高通量篩選的方法，該方法由萊納·布魯曼等人于1988年首次提出。具體操作流程為：首先構(gòu)建包含兩個或多個基因區(qū)域的DNA片段，然后將它們隨機(jī)重組并表達(dá)，最后通過多輪的高通量篩選來挑選具有特定生物活性的雙特異性抗體分子。

由于該方法的隨機(jī)性和高通量性，因此可以得到大量和多樣化的雙特異性抗體，但同時也存在著低表達(dá)量和高度異質(zhì)性的缺點。

2、二元系統(tǒng)法

二元系統(tǒng)法是將兩種不同的單抗的變異區(qū)段（VH和VL）合并在一起，構(gòu)建出含有兩種單抗特異性和交叉反應(yīng)特征的重組抗體。其中一種單抗（常規(guī)單抗）仍然保持其原有的特異性，另一種單抗（變異單抗）則發(fā)生功能性改變，具有了新的識別能力。

二元系統(tǒng)法可以通過基因工程方法和化學(xué)偶聯(lián)等方式來實現(xiàn)，具有較強(qiáng)的靈活性和高度可控性。其中最常用的方法是基因工程技術(shù)，可以通過直接連接VH和VL、插入一個銜接肽或者使用重鏈類固醇和輕鏈類固醇融合等方式來制備雙特異性抗體。

3、單鏈抗體碎片拼接法

單鏈抗體碎片拼接法是將兩個單鏈抗體拼接在一起，其中一個單鏈抗體的C端被連接到另一個單鏈抗體的N端，從而形成兩個不同的可變區(qū)結(jié)構(gòu)，能夠同時識別兩個靶點。該方法可以通過重組DNA技術(shù)進(jìn)行實現(xiàn)。

由于單鏈抗體碎片具有較小的分子量和更好的滲透性，因此可以提高進(jìn)入細(xì)胞和穿透組織的效率，是制備雙特異性抗體的重要方法之一。

4、地位特異性變異區(qū)重組法

地位特異性變異區(qū)重組法是在單克隆抗體的基礎(chǔ)上，通過人工設(shè)計或者隨機(jī)化進(jìn)化等方式，利用生物學(xué)優(yōu)勢篩選出具有多重識別能力的抗體分子。該方法通常使用重組DNA技術(shù)，并結(jié)合重組蛋白表達(dá)技術(shù)、流式細(xì)胞分選等手段進(jìn)行實現(xiàn)。

以上是一些制備雙特異性抗體的常見方法，這些方法各有優(yōu)缺點，并且適用的范圍和應(yīng)用場景也不盡相同。在選擇方法時，需要根據(jù)實驗需求和具體情況綜合考慮。