wb抗體洗脫重新孵育方法及注意事項
日期:2023-04-27 15:54:42
WB抗體洗脫重新孵育是免疫印跡技術(Western Blotting)改進方法。該方法通過洗脫已經孵育的抗體,可以將同一張膜用于重復檢測多個靶蛋白,從而提高檢測效率和節省成本。以下是關于WB抗體洗脫重新孵育的詳細介紹。
方法
在WB實驗中,通常需要對已經孵育膜進行洗脫處理,然后再次孵育使用。具體操作如下:
(1)將試劑盒中的抗體洗脫液加熱至60℃左右;
(2)將已經孵育的膜放入洗脫液中,輕輕搖動或震蕩10-15分鐘;
(3)取出膜,用PBS緩沖液洗滌3次,每次5分鐘;
(4)用TBST緩沖液預處理膜,孵育10-15分鐘;
(5)按照常規方法孵育使用。
注意事項
(1)抗體洗脫液應充分加熱,以確保最大程度地洗脫抗體。同時,液體的溫度不宜過高,避免膜的破裂和損壞。
(2)洗脫后的膜必須徹底清洗,并用TBST緩沖液進行預處理,以去除殘留抗體和保護膜的完整性。
(3)在使用抗體洗脫液時,應注意避免過度搖晃或震蕩樣品,以免引起膜的移動、泡沫的產生等影響實驗結果的不良狀況。
(4)抗體洗脫液可以反復使用,但需要經常更換,以免造成交叉污染和影響實驗結果的準確性。
應用
WB抗體洗脫重新孵育方法可以極大地提高實驗的效率和節省實驗成本。目前已廣泛應用于分子生物學、細胞生物學、生物醫學等領域的相關研究中。同時,該方法具有靈敏、特異、快捷等特點,為科學家研究細胞信號通路、生命進化等方面提供了強有力的技術支持。
方法
在WB實驗中,通常需要對已經孵育膜進行洗脫處理,然后再次孵育使用。具體操作如下:
(1)將試劑盒中的抗體洗脫液加熱至60℃左右;
(2)將已經孵育的膜放入洗脫液中,輕輕搖動或震蕩10-15分鐘;
(3)取出膜,用PBS緩沖液洗滌3次,每次5分鐘;
(4)用TBST緩沖液預處理膜,孵育10-15分鐘;
(5)按照常規方法孵育使用。
注意事項
(1)抗體洗脫液應充分加熱,以確保最大程度地洗脫抗體。同時,液體的溫度不宜過高,避免膜的破裂和損壞。
(2)洗脫后的膜必須徹底清洗,并用TBST緩沖液進行預處理,以去除殘留抗體和保護膜的完整性。
(3)在使用抗體洗脫液時,應注意避免過度搖晃或震蕩樣品,以免引起膜的移動、泡沫的產生等影響實驗結果的不良狀況。
(4)抗體洗脫液可以反復使用,但需要經常更換,以免造成交叉污染和影響實驗結果的準確性。
應用
WB抗體洗脫重新孵育方法可以極大地提高實驗的效率和節省實驗成本。目前已廣泛應用于分子生物學、細胞生物學、生物醫學等領域的相關研究中。同時,該方法具有靈敏、特異、快捷等特點,為科學家研究細胞信號通路、生命進化等方面提供了強有力的技術支持。
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