1. 結(jié)合能力

抗體(Ab)廣泛用于研究。根據(jù)它們的結(jié)合能力，抗體可分為兩類：一抗和二抗。具體來說，一抗是結(jié)合蛋白質(zhì)或抗原(Ag)或任何你研究的物質(zhì)的抗體，而二抗是與一抗結(jié)合的抗體。請看下面的圖1:

圖1. 一抗與二抗

如果您已經(jīng)閱讀了我們之前的文章《什么是抗體？》，您會對抗體的結(jié)構(gòu)有了很好的了解，然后您會發(fā)現(xiàn)更容易理解初級抗體的Fab結(jié)構(gòu)域與抗原結(jié)合，暴露其Fc結(jié)構(gòu)域以供次級抗體結(jié)合，因此次級抗體的Fab結(jié)構(gòu)域會與初級抗體的Fc結(jié)構(gòu)域結(jié)合。

由于在同一物種中，同類別抗體的Fc結(jié)構(gòu)域是相同的，所以一種類型的次級抗體可以結(jié)合多種類型的初級抗體。例如，當(dāng)以小鼠產(chǎn)生的IgG類別的抗體作為初級抗體時，可以使用一種針對小鼠IgG Fc結(jié)構(gòu)域的抗體作為次級抗體，而該次級抗體則不是由小鼠產(chǎn)生的。

2. 用途和標(biāo)記方式

在免疫分析中，通常需要使用一抗與目標(biāo)抗原結(jié)合，但不一定需要使用輔助抗體。以直接ELISA和間接ELISA為例進(jìn)行說明。直接ELISA采用直接標(biāo)記的方式，也就是將一抗直接標(biāo)記上酶用于酶反應(yīng)和信號檢測，因此不需要使用輔助抗體。而間接ELISA不直接標(biāo)記一抗，而是將輔助抗體標(biāo)記上酶，如圖2所示：

圖2. 直接ELISA與間接ELISA

選擇對一抗進(jìn)行直接標(biāo)記還是對輔助抗體進(jìn)行間接標(biāo)記取決于你的實驗需求。直接標(biāo)記和間接標(biāo)記各有優(yōu)缺點。直接標(biāo)記通常具有簡單的操作步驟，節(jié)省時間和試劑的優(yōu)勢，沒有來自輔助抗體的交叉反應(yīng)的風(fēng)險，但缺乏信號放大和靈活性，可能導(dǎo)致較高的背景信號。間接標(biāo)記則可以實現(xiàn)信號的放大，同一種輔助抗體可以與多個一抗結(jié)合，具有較高的靈活性，但操作步驟相對復(fù)雜，存在交叉反應(yīng)的風(fēng)險。

3. 來源

抗體的來源是需要考慮的重要因素。一抗的宿主物種應(yīng)與樣品的物種不同，以避免輔助抗體與樣品中的免疫球蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。此外，輔助抗體的宿主物種應(yīng)與一抗的宿主物種不同，因為輔助抗體應(yīng)針對一抗的宿主物種。

例如，如果你研究的是小鼠樣品，你將需要一種不同于小鼠的動物生成的一抗，比如兔子生成的一抗。然后，如果你使用針對小鼠的兔子抗體作為一抗，你將需要一種不同于兔子的動物生成的輔助抗體，比如山羊生成的輔助抗體。

為了能夠檢測目標(biāo)抗原，輔助抗體不僅應(yīng)具有對一抗宿主物種的特異性，還應(yīng)具有對一抗的同種型的特異性。例如，如果一抗是兔子生成的IgG1抗體，你將需要一種可以與兔子IgG1抗體發(fā)生反應(yīng)且不是由兔子生成的輔助抗體。

4. 單克隆

一抗可以是單克隆抗體（mAb）或多克隆抗體（pAb）。

讓我們首先比較一下單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體只能識別抗原上的一個表位，而多克隆抗體可以識別抗原上的多個表位。由于這個原因，單克隆抗體和多克隆抗體具有不同的特性和用途。單克隆抗體具有高特異性和高重復(fù)性，與多克隆抗體相比，在染色中產(chǎn)生的背景噪音較少。然而，由于其高特異性，當(dāng)目標(biāo)表位受到抗原的化學(xué)處理而改變時，單克隆抗體可能無法起作用。相比之下，多克隆抗體具有高親和力，對抗原的微小變化具有耐受性，并且可以實現(xiàn)更可靠的檢測。但是，多克隆抗體的不同批次之間存在更大的變異性，并且更容易在染色中產(chǎn)生較高的背景噪音。

如果您的實驗需要高特異性，使用單克隆抗體作為一抗可能是一個不錯的選擇。如果陽性信號較弱，可以嘗試使用多克隆抗體。由于多克隆抗體可以識別多個表位，它們在免疫沉淀（IP）和染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）等實驗中更有可能獲得更好的結(jié)果。但是，如果您想探測抗原的特定結(jié)構(gòu)域，多克隆抗體就不適用了，此時單克隆抗體作為一抗可能更好。

二抗可以是單克隆抗體或多克隆抗體，它與一抗或其片段結(jié)合。二抗有不同的形式。首先，二抗可以針對一抗的整個分子。例如，一抗通常是IgG同種型。那么，您將需要一種針對IgG H＆L（重鏈和輕鏈）的抗體作為二抗，它與主要IgG抗體的重鏈和輕鏈都反應(yīng)。此外，這種抗IgG H＆L抗體還與一抗所屬物種的其他免疫球蛋白類別（如IgM和IgA）反應(yīng)，因為同一物種中的所有免疫球蛋白都具有相同的輕鏈。

5. 預(yù)吸附

二抗有時需要進(jìn)行額外的純化過程，稱為預(yù)吸附，以增加特異性并減少非特異性結(jié)合。在預(yù)吸附過程中，含有二抗的溶液通過含有固定血清蛋白或潛在交叉反應(yīng)物種（如樣品的物種）的柱狀基質(zhì)。通過這個過程，溶液中的非特異性抗體將被去除，而高度特異性的二抗將被保留下來。例如，如果您正在使用小鼠組織進(jìn)行研究，可以選擇已經(jīng)吸附有小鼠血清或小鼠IgG的二抗。

預(yù)吸附的二抗產(chǎn)生較少的非特異性結(jié)合，因此不太可能產(chǎn)生非特異性背景。當(dāng)您在多標(biāo)記實驗中確定蛋白質(zhì)表達(dá)，或者研究免疫球蛋白豐富的組織或細(xì)胞時，建議您使用預(yù)吸附的二抗。

總之，一抗和二抗之間存在幾個區(qū)別。首先，一抗和二抗具有不同的結(jié)合能力。一抗與檢測的抗原結(jié)合，而二抗與一抗結(jié)合，通常是它們的Fc區(qū)域。其次，在免疫分析中始終需要一抗，而二抗不一定需要，這取決于實驗方法（直接或間接標(biāo)記）。第三，生成一抗的物種與樣品的物種不同，生成二抗的物種也與一抗的來源物種不同。第四，一抗和二抗都可以是單克隆或多克隆抗體，但在選擇其克隆性時需要考慮不同的因素。最后，二抗有時需要進(jìn)行預(yù)吸附，而一抗通常沒有這種需求。

現(xiàn)在，您可能對一抗和二抗之間的區(qū)別有了更好的理解，并且將更容易選擇適合您實驗的正確抗體。選擇合適的抗體從來都不是一項簡單的任務(wù)。如果您選擇了不適合您實驗的抗體，可能會浪費金錢、時間和寶貴的樣品。為了簡化抗體的選擇，您可以繼續(xù)閱讀我們網(wǎng)站上的另一篇文章：《如何選擇合適的抗體？》