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單抗、多抗、重組抗體應(yīng)如何選擇

日期:2023-07-26 09:26:17

隨著生命科學(xué)的快速發(fā)展,針對蛋白質(zhì)的研究日益增多,突顯了抗體在實(shí)驗(yàn)中的重要作用。面對多樣且復(fù)雜的抗體試劑市場,選擇適合實(shí)驗(yàn)的抗體尤為重要。在準(zhǔn)備購買抗體時(shí),需要考慮許多因素。例如,實(shí)驗(yàn)的目的是什么,這種抗體能否在預(yù)期的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中使用?這種抗體是否適用于實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞或組織?

如果您研究的是針對同一目標(biāo)的單克隆、多克隆或重組抗體,應(yīng)該如何選擇?它們之間有什么區(qū)別?是否有一種比其他種類更好,或者它們都是為不同的目的而設(shè)計(jì)的?這些問題很復(fù)雜,但絕對值得探討。

在本文中,我們將重點(diǎn)介紹這三種抗體及其之間的差異。


1. 多克隆抗體

多克隆抗體(pAbs)是由體內(nèi)不同B細(xì)胞譜系產(chǎn)生的異質(zhì)混合物,可以識(shí)別同一抗原中的多個(gè)不同表位。多克隆抗體的生產(chǎn)通常包括收集免疫動(dòng)物的血液,分離免疫球蛋白,并進(jìn)行親和純化以去除非特異性抗體 [1]。多克隆抗體的生產(chǎn)最常在兔子中進(jìn)行,但也可以在有蹄類動(dòng)物(綿羊、山羊、馬、豬等)、嚙齒類動(dòng)物和雞等動(dòng)物中進(jìn)行 [2]。與其他物種相比,兔子更容易且成本較低,能對包括小分子和帶有或不帶有翻譯后修飾的多肽在內(nèi)的各種抗原產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答。從兔子獲取血液也相對容易。

多克隆抗體具有較弱的特異性、較強(qiáng)的親和力和較高的敏感性,但容易發(fā)生非特異性染色。因此,多克隆抗體特別適用于檢測或捕獲低豐度抗原。如果表達(dá)量不清楚,并且存在經(jīng)濟(jì)和時(shí)間限制,也可以選擇多克隆抗體。多克隆抗體通常用作免疫分析中的二抗,包括ELISA、Western blot和免疫組織化學(xué)。在ELISA中,一抗(單克隆抗體)與目標(biāo)抗原結(jié)合,而HRP偶聯(lián)的二抗(多克隆抗體)用于結(jié)合一抗,放大信號(hào)從而提高檢測效果 [3]。由于相對于單克隆抗體而言,多克隆抗體具有更高的敏感性,因此它們特別適用于癌癥或免疫性疾病標(biāo)記物的早期檢測 [4]。由于多克隆抗體通常包含針對某一特定抗原的不同表位,包括對變性抗原具有抗體結(jié)合能力的表位,因此它們在深層固定的樣本中也能很好地工作。多克隆抗體最常用于石蠟包埋組織切片的染色。此外,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,多克隆抗體還用于現(xiàn)場監(jiān)測農(nóng)藥殘留。


2. 單克隆抗體

單克隆抗體是來源于單個(gè)B細(xì)胞克隆的同種抗體,能夠檢測抗原中的單個(gè)表位。所有單克隆抗體最初都是多克隆抗體混合物,但通過選擇或克隆過程進(jìn)行分離,以鑒定和擴(kuò)大所需的單價(jià)克隆。單克隆抗體通常是從嚙齒類動(dòng)物、兔子和駱駝等宿主中產(chǎn)生,并根據(jù)所需抗體類型采用各種方法進(jìn)行生產(chǎn)。

傳統(tǒng)上,單克隆抗體的生產(chǎn)包括用目標(biāo)蛋白免疫宿主動(dòng)物,提取能識(shí)別和響應(yīng)抗原的B細(xì)胞,然后將B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,形成穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞,可持續(xù)產(chǎn)生目標(biāo)抗體,最后在細(xì)胞培養(yǎng)上清液或小鼠腹水中培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞系。由K?hler和Milstein首次提出的雜交瘤技術(shù) [5] 需要進(jìn)行免疫以產(chǎn)生抗體,并受到個(gè)體健康狀況、免疫狀態(tài)等因素的影響,導(dǎo)致所產(chǎn)生的抗體一致性和重復(fù)性較差。此外,動(dòng)物衍生的抗體常常會(huì)引起患者的免疫反應(yīng),限制了它們作為臨床治療的應(yīng)用。

單克隆抗體具有較強(qiáng)的特異性,但親和力和敏感性較低。它們適用于檢測相對高表達(dá)水平的抗原。由于單克隆抗體能夠結(jié)合細(xì)胞特異性抗原并靶向這些細(xì)胞以消除或中和其對機(jī)體可能產(chǎn)生的任何有害效應(yīng),它們已成為癌癥 [6] [7]、各種自身免疫性疾病和其他疾病的有效治療方法。單克隆抗體廣泛用于生物醫(yī)學(xué)研究和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,用于治療、診斷和研究疾病,以及開發(fā)和測試新藥。美國食品和藥物管理局(FDA)已批準(zhǔn)多種單克隆抗體用于治療,并有數(shù)百種正在進(jìn)行各個(gè)階段的臨床試驗(yàn)。

單克隆抗體可用于分析抗原的精細(xì)結(jié)構(gòu)和測試抗原與抗體之間的未知結(jié)構(gòu)關(guān)系。針對復(fù)雜生物混合物中特定分子的抗體可以用于分離、分析和純化特定的分子抗原。單克隆抗體試劑可用于臨床診斷和治療,包括抗體-藥物偶聯(lián)物 [8] 和針對新興傳染病的疫苗 [9]

單克隆抗體和多克隆抗體的主要區(qū)別

圖1. 單克隆抗體和多克隆抗體的主要區(qū)別


3. 重組抗體

重組抗體,也稱為基因工程抗體,是利用基因重組技術(shù)制備的抗體。將抗體基因克隆到表達(dá)載體中,然后轉(zhuǎn)染到適合的宿主細(xì)胞系中進(jìn)行抗體表達(dá)。重組抗體使得制備人源化抗體和全人源抗體成為可能。哺乳動(dòng)物細(xì)胞系是制備重組抗體最常用的方法,也可以使用細(xì)菌、酵母或昆蟲來源的細(xì)胞系。

與單克隆抗體相比,重組抗體可以在無需免疫的情況下穩(wěn)定大規(guī)模生產(chǎn)。避免了由小鼠來源抗體引起的人體免疫反應(yīng)。重要的是,重組抗體具有良好的一致性、高重復(fù)性和較好的再現(xiàn)性。更多的基因組合可以進(jìn)行重組,包括抗體片段表達(dá)、亞型替代、嵌合抗體、抗體人源化等。重組抗體存在多種形式,從IgG到scFv、Fab或VHH片段,以及雙特異性和三特異性變體 [10]。根據(jù)治療需求可以制備新的抗體。由于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染篩選出穩(wěn)定的細(xì)胞系進(jìn)行體外表達(dá),重組抗體適用于單克隆抗體藥物的快速工業(yè)化生產(chǎn)。較小的分子量使重組抗體具有更強(qiáng)的穿透能力,因此更容易到達(dá)病變的核心部位。重組抗體可以通過原核細(xì)胞、真核細(xì)胞或植物表達(dá)系統(tǒng)大規(guī)模生產(chǎn),大大降低了生產(chǎn)成本。


4. 多克隆抗體、單克隆抗體和重組抗體的優(yōu)缺點(diǎn)

隨著抗體制備技術(shù)的快速發(fā)展,多克隆抗體、單克隆抗體和重組抗體相繼出現(xiàn)。每種抗體都有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn),也有不可避免的缺點(diǎn)。因此,一些實(shí)驗(yàn)將幾種抗體串聯(lián)起來,利用它們各自的優(yōu)勢來獲得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。下表列出了三種抗體在不同方面的優(yōu)缺點(diǎn)。

多克隆抗體 單克隆抗體 重組抗體
重復(fù)性 較低 高;批次間差異小 更高;高純度,批次間差異小
特異性 強(qiáng) 更強(qiáng)
生產(chǎn)周期 2到3個(gè)月的開發(fā)和生產(chǎn)周期 4到6個(gè)月的開發(fā)周期;4到6周的生產(chǎn)周期 4個(gè)月的開發(fā)周期;1到6周的生產(chǎn)周期
動(dòng)物免疫
亞型切換 困難 困難 方便
表達(dá)系統(tǒng) 常見的哺乳動(dòng)物細(xì)胞(兔子、綿羊、山羊等) 小鼠腹水法、細(xì)胞培養(yǎng)上清法和重組抗體表達(dá)系統(tǒng) 常見的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系,也可以在特殊工程改造的細(xì)胞系(酵母、細(xì)菌、昆蟲和轉(zhuǎn)基因植物)中表達(dá)
成本 相對較低 生產(chǎn)昂貴;需要更多專業(yè)人員操作 需要技術(shù)專長和大量的時(shí)間和金錢投入來生產(chǎn)
人類免疫反應(yīng) 不可避免 不可避免 可避免

當(dāng)你準(zhǔn)備購買抗體時(shí),除了考慮抗體類型、宿主來源、純度、免疫原、反應(yīng)物種、標(biāo)記物、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證應(yīng)用和支持?jǐn)?shù)據(jù)外,還有一些必要的參考因素。合適的抗體可以幫助你獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

How to choose a commercial antibody

圖2. How to choose a commercial antibody


參考文獻(xiàn):

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