1. 什么是TGF-β家族？

TGF-β家族是一類在結(jié)構(gòu)、功能上相關(guān)的轉(zhuǎn)化生長因子，包括TGF-β、活化素（Activin）、骨形成蛋白（bone morphogenic proteins，BMPs）等。TGF-β存在TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3三種亞型。其中，TGF-β1是其主要存在形式，具有最強(qiáng)的生物活性。BMPs屬于TGF-β超家族成員，大約有20多種，如BMP2和4，5，6，7，8a和8b，BMP9和BMP10，以及BMP12，BMP13和BMP14。TGF-β受體（TGF-β receptors，TβR）廣泛存在于正常細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞表面，包括I型（TβRI）、II型（TβRII）、III型TβRIII（betaglycan）及endoglin等。目前研究較多的是I型和II型兩種受體，參與多種信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。迄今為止，已鑒定出七種I型TGF-β受體（TβRI），分別命名為活化素受體樣激酶1-7 (activin receptor-like kinase，ALK1-7)（點(diǎn)擊查看“TGF-beta受體”專題報(bào)道） ^[2-4]。

2. 什么是ACVRL1？

2.1 ACVRL1的結(jié)構(gòu)

活化素受體樣激酶1（activin receptor-like kinase-1，ACVRL1/ALK1）屬于TGF-β家族的I型受體（TβRI或ALK）成員之一，是絲氨酸/蘇氨酸激酶受體。ACVRL1/ALK1基因定位于12q13，含10個(gè)外顯子，基因組全長約15 kb，編碼ACVRL1受體蛋白。ACVRL1是一種整合在細(xì)胞膜上的同形二聚體跨膜糖蛋白，含503個(gè)氨基酸殘基，由N端胞外區(qū)、跨膜區(qū)和幾乎全由絲氨酸-蘇氨酸激酶區(qū)構(gòu)成的胞內(nèi)區(qū)三部分組成。ACVRL1與其他I型受體在絲氨酸-蘇氨酸激酶亞結(jié)構(gòu)域、GS結(jié)構(gòu)域（位于激酶結(jié)構(gòu)域之前的富含甘氨酸和絲氨酸的區(qū)域）和C末端尾部具有高度的相似性（圖1） ^[5-6]。

2.2 ACVRL1的表達(dá)和功能

TGF-β家族的I型受體ACVRL1在內(nèi)皮細(xì)胞和一些富含血管的組織，如肺、胎盤中具有高表達(dá)，其激活后可刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖，與血管發(fā)生及形成密切相關(guān)。ACVRL1受體主要與轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-βs）結(jié)合，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、遷移、存活、粘附和發(fā)育等，例如ACVRL1在骨骼肌細(xì)胞中，促進(jìn)肌肉再生，在成纖維細(xì)胞中促進(jìn)傷口愈合。同時(shí)，ACVRL1作為重要的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)分子，在多種生理和病理過程中扮演關(guān)鍵角色，陸續(xù)研究表面，異常的ACVRL1表達(dá)與多種癌癥的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，凸顯其在腫瘤病理生理中的重要性 ^[7-8]。

圖1. ACVRL1/ALK1的結(jié)構(gòu) ^[5]

3. 什么是ACVRL1的配體？

ACVRL1的配體來自TGF-β家族成員，其中TGF-β與ALK1的親和力較低，而BMP和BMP10被認(rèn)為是與ACVRL1/ALK1具有高親和力的生理學(xué)配體。但是，這兩個(gè)配體并不會(huì)直接激活A(yù)CVRL1/ALK-1的絲氨酸/蘇氨酸激酶活性，而需要在TβR-II或激活素II型受體的協(xié)助下才能完成激活過程。當(dāng)配體與TGF-β受體相結(jié)合時(shí)，I型受體收到磷酸化后活化，而后進(jìn)一步使包括ACVRL1/ALK-1的I型受體激活，并結(jié)合形成受體復(fù)合物，進(jìn)一步激活下游的相關(guān)信號(hào)通路。這意味著，ACVRL1/ALK1的激活并不完全由其配體決定，而是由其配體與其他受體的相互作用決定。因此，ACVRL1/ALK-1被認(rèn)為是一種“孤兒”受體，其活性的調(diào)節(jié)涉及多種信號(hào)通路和復(fù)合物的相互作用。這種復(fù)雜的調(diào)控機(jī)制使得ACVRL1/ALK1在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和生物學(xué)效應(yīng)中扮演著多樣化而關(guān)鍵的角色 ^{[6, 9]}。

4. ACVRL1相關(guān)的信號(hào)通路

4.1 ACVRL1-Smads信號(hào)調(diào)節(jié)機(jī)制

TGF-β需要ACVRL1（ALK1）和ALK5受體來發(fā)揮作用。在信號(hào)傳導(dǎo)中，TGF-β首先與TβRII結(jié)合，激活TβRI，形成復(fù)合物并啟動(dòng)Smads信號(hào)通路。在內(nèi)皮細(xì)胞中，激活兩種不同的Smad信號(hào)通路會(huì)導(dǎo)致相反的效應(yīng)。一方面，當(dāng)BMP-9（或-10）與ACVRL1/ALK1受體結(jié)合后，會(huì)激活Smad1/Smad5信號(hào)級(jí)聯(lián)，進(jìn)一步招募BMPRII受體和輔助受體Endoglin（ENG）形成細(xì)胞表面復(fù)合物。TGF-β也可以通過結(jié)合到活躍的Tβ RII而啟動(dòng)此信號(hào)通路，隨后招募并磷酸化ACVRL1/ALK1。Endoglin有助于配體-ALK1相互作用，并成為受體復(fù)合物的一部分 ^[10-11]。

當(dāng)ALK1誘導(dǎo)Smad1/5（R-Smads）磷酸化后，這些激活的R-Smads能與共同型Smad4形成復(fù)合物，隨后轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核，調(diào)控特定靶基因的轉(zhuǎn)錄，例如ID1和ID3。這些調(diào)控反應(yīng)可能導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的增加。另一方面，TGF-β也可以激活（依賴于Tβ RII）ALK5受體，導(dǎo)致Smad2/Smad3的磷酸化。激活的Smad2/3也能與Smad4形成復(fù)合物，并進(jìn)入細(xì)胞核。這些核內(nèi)Smad復(fù)合物可能調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，例如PAI1，對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移產(chǎn)生抑制效應(yīng)（圖2） ^[10-11]。

圖2. ACVRL1相關(guān)的信號(hào)通路 ^[11]

4.2 ACVRL1抗腫瘤血管生成機(jī)制

ALK1作為TGF-β/BMPS家族的I型受體，與血管發(fā)生及形成密切相關(guān)，是介導(dǎo)TGF-β家族調(diào)節(jié)血管生成的重要因子。近年來發(fā)現(xiàn)，抑制ALK1信號(hào)通路可作為抗腫瘤血管生成的另一重要策略。研究發(fā)現(xiàn)，在胚胎肝臟中，ALK1通過與SMAD6相互作用，調(diào)節(jié)血管發(fā)育和功能。當(dāng)SMAD6缺失時(shí)，ALK1信號(hào)傳導(dǎo)過度激活，導(dǎo)致胚胎肝臟血管畸形和出血。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，減少Alk1基因劑量可以挽救由Smad6缺失引起的胚胎肝臟出血和微血管毛細(xì)血管化。機(jī)制研究表明，ALK1信號(hào)傳導(dǎo)過度激活會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞連接不穩(wěn)定和收縮性增加。這會(huì)導(dǎo)致血管壁脆弱，容易破裂。因此，ALK1在胚胎肝臟血管發(fā)育中發(fā)揮著重要的“守護(hù)者”作用。它通過與SMAD6相互作用，維持血管發(fā)育和功能的正常。ALK1功能喪失會(huì)導(dǎo)致血管畸形和出血，表明平衡的ALK1信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)于血管發(fā)育至關(guān)重要 ^[12]。

5. ACVRL1在疾病中的研究

5.1 ACVRL1和遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥研究

ACVRL1（ALK1）作為一種跨膜受體，參與血管生成和血管發(fā)育相關(guān)的關(guān)鍵信號(hào)通路。抑制ALK1信號(hào)傳導(dǎo)已成為各種血管生成相關(guān)疾?。ㄈ邕z傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥）的一種有前途的研究策略。遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥（hereditary hemorrhagic telangiectasis，HHT）是常染色體顯性遺傳性血管發(fā)育異常的一種疾病。臨床可分HHT1、HHT2以及幼年性息肉病伴HHT（JPHT）三種表型。目前為止，已發(fā)現(xiàn)ALK-l、ENG（endoglin，CD105）和SMAD4基因突變可導(dǎo)致HHT。相關(guān)的研究已揭示，ENG基因突變引起HHT1型，ALK-1基因突變引起HHT2型，SMAD4基因突變引起JPHT型。因此，抑制ACVRL1（ALK1）可能成為HHT等多種血管生成相關(guān)疾病研究的重要靶點(diǎn) ^[13]。

5.2 ACVRL1和系統(tǒng)性硬皮病研究

一項(xiàng)研究分析了ACVRL1（ALK1）在系統(tǒng)性硬皮病患者皮膚成纖維細(xì)胞中的表達(dá)功能情況。系統(tǒng)性硬皮?。⊿ystemic Sclerosis，SSc）是一種結(jié)締組織疾病，其特征是細(xì)胞外基質(zhì)在皮膚和內(nèi)臟等組織中的大量沉積，導(dǎo)致纖維化和功能障礙，同時(shí)伴隨廣泛的血管損傷和免疫系統(tǒng)的激活。這項(xiàng)結(jié)果顯示，在SSc患者中，ALK1表達(dá)量明顯高于正常人。免疫熒光結(jié)果證實(shí)ALK1主要分布在成纖維細(xì)胞的胞膜和胞漿。ALK1 siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，成纖維細(xì)胞中ALK1、纖維連接蛋白和PAL-1的表達(dá)水平均呈下降趨勢(shì)。相反，TGFβ1處理對(duì)照siRNA組后，對(duì)以上蛋白表達(dá)產(chǎn)生顯著促進(jìn)作用。這些研究結(jié)果暗示著，TGFβ1通過ALK1在成纖維細(xì)胞中調(diào)節(jié)了纖維連接蛋白和PAI-1的表達(dá)。這可能意味著ALK1在系統(tǒng)性硬皮病的纖維化過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用 ^[14]。

5.3 ACVRL1和腫瘤研究

目前國外內(nèi)關(guān)于ACVRL1（ALK1）基因在腫瘤中的相關(guān)報(bào)道較少，只是通過不同研究實(shí)驗(yàn)證實(shí)了ALK1基因與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。在結(jié)直腸癌（CRC）治療中，瑞戈非尼（Regorafenib）和索拉非尼（Sorafenib）等多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑（mTKI）已獲批準(zhǔn)，但其在CRC療效受限。最新實(shí)驗(yàn)表明，ACVRL1介導(dǎo)的耐藥機(jī)制可能解釋了這一限制。ACVRL1的敲低或過表達(dá)顯著影響CRC細(xì)胞對(duì)mTKI的體內(nèi)外敏感性，因此，針對(duì)ACVRL1可能是克服mTKI耐藥的有效策略 ^[15]。

一項(xiàng)Ib期研究分析了Dalantercept和Sorafenib聯(lián)合治療晚期肝癌的安全性和有效性。Dalantercept是一種可溶性的ALK1受體融合蛋白，通過結(jié)合BMP9和BMP10，抑制ALK1信號(hào)通路，從而干擾成熟血管的形成，雖然該組合的抗腫瘤活性很低，但是ALK1作為HCC的研究靶點(diǎn)，其新穎性已引起研究人員的關(guān)注 ^[16]；在非小細(xì)胞肺癌中，研究提示，相對(duì)于正常肺組織，ALK1 mRNA及蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中特異性上調(diào)表達(dá)，推測(cè)ALK1基因可能作為非小細(xì)胞肺癌分子靶向治療的一個(gè)潛在靶點(diǎn)或者血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物 ^[17]。

5.4 ACVRL1和其它疾病研究

ACVRL1在其他疾病研究中也同樣發(fā)揮重要作用。針對(duì)ALK1在腦神經(jīng)方面的研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1-ALK1p-Smad1對(duì)神經(jīng)保護(hù)起著作用，相反，TGF-β1-ALK5-p-Smad2/3則促發(fā)癲痛。在腦組織受損時(shí)，神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞可以通過TGF-β1-ALK1-p-Smad1和TGF-β1-ALK5-p-Smad2/3通路發(fā)揮功能 ^[18]。此外，LRG-TGF-β-Alk-1/TGF?RII-Smads被探討作為動(dòng)脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血后慢性腦積水的預(yù)測(cè)生物標(biāo)志物 ^[19]。

針對(duì)ALK1和ALK2在BMP9誘導(dǎo)成骨中的作用，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)了其重要性。在體內(nèi)體外水平驗(yàn)證了ALK1和ALK2對(duì)于BMP9誘導(dǎo)成骨的影響。在體外實(shí)驗(yàn)中，siALK1和siALK2能有效抑制堿性磷酸酶、鈣鹽和熒光素酶的活性，這三項(xiàng)是驗(yàn)證BMP9信號(hào)傳導(dǎo)和體外成骨的重要指標(biāo)。值得注意的是，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明siALK1和siALK2不僅抑制了BMP9信號(hào)傳導(dǎo)，還阻礙了BMP9引導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的過程。這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了ALK1在調(diào)控BMP9介導(dǎo)的骨細(xì)胞分化中的重要性，為未來針對(duì)骨相關(guān)疾病的治療提供了有力的依據(jù) ^[20]。