ROR1藥物研發(fā)熱潮：默沙東與石藥集團的臨床試驗新動態(tài)
日期：2024-12-03 10:56:00
在腫瘤治療領域，ROR1已成為一個備受矚目的靶點，全球多家制藥企業(yè)正積極推進ROR1新藥進入臨床試驗階段。近期，默沙東以27.5億美元收購獲得的新藥Zilovertamab vedotin（MK-2140）臨床試驗申請再次獲得受理，該藥物由人源化單克隆抗體UC-961與微管抑制劑MMAE通過蛋白水解可切割的連接子偶聯(lián)而成，能夠精準靶向ROR1陽性腫瘤細胞并釋放細胞毒性藥物，有效抑制腫瘤生長。MK-2140在治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤的臨床試驗中已展現(xiàn)出積極的療效和生存期改善。石藥集團的ROR1 ADC藥物SYS6005，其臨床試驗申請已獲得中國國家藥監(jiān)局藥品審評中心（CDE）的受理，標志著該藥物有望用于治療晚期實體瘤患者。SYS6005通過與腫瘤細胞表面的ROR1受體結(jié)合，利用細胞內(nèi)吞機制進入細胞內(nèi)部，并在溶酶體內(nèi)釋放毒素以殺傷腫瘤細胞。這些不僅表明ROR1靶向藥物的研究熱度，更顯示了ROR1在腫瘤治療中的重要潛力。目前，ROR1靶點藥物因其在臨床試驗中的初步成功而備受期待，預示著未來可能為癌癥患者帶來新的治療選擇 [1-2]。
1. 什么是ROR1？
ROR1是受體酪氨酸激酶樣孤兒受體（ROR）家族成員之一，屬于I型受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTK)家族。與核受體中的ROR家族不同，ROR是一類膜受體。它們與家族中的原肌球蛋白激酶受體家族(tropomyosin-related kinase, Trk)、骨骼肌特異性酪氧酸激酶樣受體家族(muscle specific knase, MuSK)和神經(jīng)營養(yǎng)因子酯氨酸激酶受體家族(neurotrophic tyrosine kinase receptor, NT-RTK)關系密切，由于ROR蛋白最初發(fā)現(xiàn)時配體未知，所以被定義為孤兒受體 [3]。
ROR家族的另一個成員是ROR2，ROR1與ROR2氨基酸序列的同源性達58%。其中ROR1又含有2種亞型：完整的細胞膜受體型ROR1以及截短型變異體。截斷型變異體主要分為無胞外結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1I與只含胞外結(jié)構(gòu)的可溶型ROR1 [4]。可溶型ROR1的表達在正常人與腫瘤患者中并無差異，血清中的表達量很低或者檢測不到，且與疾病的進展和嚴重程度無關，而完整結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1在多種腫瘤組織特異性高水平表達 [5]。后文中所提到的ROR1都是指完整結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1。
2. ROR1的結(jié)構(gòu)與功能
ROR1是一種跨膜受體酪氨酸激酶蛋白。ROR1編碼基因共2814bp，位于染色體1p31.3。ROR1膜蛋白由937個氨基酸組成，分子量約105 kDa。ROR1結(jié)構(gòu)在生物種間高度保守，如人與鼠的ROR1氨基酸序列同源性可達97%。如圖1所示，人源ROR1由一個胞外的免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(Ig)、兩個富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域(FZD)、近膜kringle結(jié)構(gòu)域、單次跨膜結(jié)構(gòu)以及一個胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域（TKD）、兩個絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域(S/TRD)和一個脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域（PRD）組成 [6]。
圖1. The structure of ROR1
*圖片參考文獻發(fā)表在Protein Cell上[6]。
免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域和半胱氨酸富集結(jié)構(gòu)域與ROR1結(jié)合配體的功能相關。其中FZD結(jié)構(gòu)域由10個保守的半胱氨酸殘基和5個相應的二硫鍵組成。FZD結(jié)構(gòu)還見于平滑肌家族受體（如Smo）、卷曲家族受體（如sFRP）、金屬羧肽酶Z（CPZ）、collagen α1 XVIII和低密度脂蛋白受體相關蛋白 (LRP)。這些蛋白大都可以結(jié)合Wnt蛋白并參與Wnt通路的信號轉(zhuǎn)導。目前大量研究己經(jīng)證實ROR1也是通過FZD結(jié)合Wnt5a并激活非經(jīng)典Wnt信號通路 [7] [8]。 Kringle結(jié)構(gòu)域在ROR家族中比較保守，由80個氨基酸組成 [9]。其結(jié)構(gòu)特點是含有三個由二硫鍵形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，這三個環(huán)狀結(jié)構(gòu)也參與了ROR受體識別Wnt蛋白的過程。
ROR的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域在生物體高度保守，和Trk、MuSK的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域極其相似。但ROR1蛋白在這段高度保守的區(qū)域內(nèi)存在某些氨基酸序列的改變,提示其胞內(nèi)激酶活性有可能發(fā)生改變。絲/蘇氨酸、脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域是由絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域、脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域、絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域三個結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成。該區(qū)域存在潛在的磷酸化位點、與下游信號傳導有關。
3. Wnt5a/ROR1與腫瘤
目前關于ROR1信號傳導的主流說法是，ROR1可通過介導非經(jīng)典Wnt信號通路（non-canonical Wnt pathways）的信號傳遞，在多種生理過程中發(fā)揮重要作用，其中包括調(diào)節(jié)細胞分裂、增殖、遷移、和細胞趨化，尤其是Wnt5a。Wnt5a是典型的非經(jīng)典Wnt信號通路的激活因子，參與NF-κB亞基p65的磷酸化，激活腫瘤細胞中NF-κB通路，促進細胞遷移和侵襲，EMT、癌轉(zhuǎn)移等。接下來，我們具體了解下ROR1是如何通過Wnt5a信號通路激活腫瘤細胞的。
Wnt5a/ROR1在多種癌癥中的高度表達。作為Wnt5a的受體，ROR1參與激活腫瘤細胞NF-κB通路。NF-κB通路是炎癥反應和免疫調(diào)控的掌舵者，在多種腫瘤類型中組成性激活。如圖2所示，Wnt5a激活受體ROR1或FZD5，導致Dvl2/3激活和Akt磷酸化。Akt繼而促進IKKα磷酸化激活IKK復合體，IKK復合體負責IκBα降解和NF-κB亞基p65的磷酸化。磷酸化的p65轉(zhuǎn)移到細胞核促進包括Wnt5a在內(nèi)的靶基因轉(zhuǎn)錄表達。Wnt5a的分泌又促進新一輪的自主反饋循環(huán)。自主反饋循環(huán)ROR1/Akt/p65通路的激活會進一步促進促炎因子（如IL-6）和趨化因子（如CCL2）的分泌。
圖2. The diagram of Wnt5a/ROR1 signaling
此外，有多項研究已將ROR1的表達與YAP / TAZ轉(zhuǎn)錄的激活相關聯(lián)，從而增強腫瘤發(fā)生和化學耐藥性 [10] [11]。如圖3所示，Wnt5a與ROR1 / FZD復合物的結(jié)合，然后通過結(jié)合Gα12/13進一步激活RhoA，從而抑制Lats1/2活性，進而導致YAP / TAZ去磷酸化和核易位。易位到細胞核里的YAP/TAZ與TEAD結(jié)合后可以誘導涉及細胞增殖、干細胞自我更新和腫瘤發(fā)生基因的轉(zhuǎn)錄。增加的YAP/TAZ轉(zhuǎn)錄反過來又可以上調(diào)ROR1表達。
圖3. Crosstalk between Wnt5a-ROR1 signaling and YAP/TAZ pathway
*圖片參考文獻發(fā)表在Cells上[12]。
4. 靶向ROR1的臨床意義
ROR1靶向藥物的研究正在迅速發(fā)展，高達90多款臨床藥物在研，涉及多種藥物類型和治療機制，主要包括CAR-T細胞療法、ADC藥物、單克隆抗體等。
CAR-T藥物：以ONCT - 808和JCAR 024為例，通過基因工程技術對患者自身的T細胞進行改造，使其表面表達能夠特異性識別ROR1的嵌合抗原受體（CAR）。當回輸?shù)交颊唧w內(nèi)后，這些CAR - T細胞能夠精準識別并結(jié)合腫瘤細胞表面的ROR1，從而激活T細胞的殺傷功能，直接對腫瘤細胞發(fā)動免疫攻擊，引發(fā)腫瘤細胞凋亡。
ADC藥物：如MK - 2140這類ADC藥物，由靶向ROR1的人源化IgG1單克隆抗體、可裂解連接子以及毒性載荷（如單甲基澳瑞他汀E，MMAE）組成。藥物首先通過抗體部分與腫瘤細胞表面的ROR1特異性結(jié)合，隨后被腫瘤細胞內(nèi)吞進入細胞內(nèi)部。在細胞內(nèi)，連接子在特定酶的作用下發(fā)生裂解，釋放出毒性載荷MMAE，MMAE作為微管蛋白抑制劑，可干擾腫瘤細胞的微管功能，進而抑制細胞有絲分裂，最終導致腫瘤細胞死亡。
單抗藥物：如ZILO-301（Zilovertamab）是一種人源化單克隆抗體，特異性地靶向ROR1。它能夠精確地識別并結(jié)合腫瘤細胞表面的ROR1受體。這種結(jié)合可能會觸發(fā)機體自身的免疫反應。比如，激活補體系統(tǒng)，誘導補體依賴的細胞毒性（CDC）作用，或者通過抗體依賴的細胞介導的細胞毒性（ADCC）機制，使免疫細胞（如自然殺傷細胞等）識別并殺傷腫瘤細胞。
這些藥物主要針對ROR1在腫瘤細胞中的異常高表達，涵蓋了血液系統(tǒng)惡性腫瘤（如白血病、淋巴瘤等）以及實體瘤（如乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌等），有望為不同類型腫瘤患者提供新的治療策略。多家機構(gòu)，包括Oncternal Therapeutics、默沙東、勃林格殷格翰等，正在積極推動這些藥物的研發(fā)，最高階段已處于臨床3期，預示著ROR1靶向藥物有望在不久的未來上市，為腫瘤精準治療帶來重大突破，為癌癥患者提供新的治療選擇。
臨床研究表部分展示：
| 藥物 | 靶點 | 藥物類型 | 在研適應癥（疾病名） | 在研機構(gòu) | 最高研發(fā)階段 |
|---|---|---|---|---|---|
| Zilovertamab | ROR1 | 單克隆抗體 | 套細胞淋巴瘤 | 慢性淋巴細胞白血病 | University of California San Diego | University of California | Oncternal Therapeutics, Inc. | 臨床3期 |
| Zilovertamab vedotin | ROR1 x Tubulin | ADC | 彌漫性大B細胞淋巴瘤 | 復發(fā)性彌漫性大B細胞淋巴瘤 | B細胞淋巴瘤 | B細胞惡性腫瘤 | 慢性淋巴細胞白血病 | 濾泡性淋巴瘤 | 套細胞淋巴瘤 | 難治性彌漫性大 B 細胞淋巴瘤 | 播散性彌漫性大 B 細胞淋巴瘤 | 膀胱癌 | 伯基特淋巴瘤 | 尤文肉瘤 | 神經(jīng)母細胞瘤 | 前體B細胞急性淋巴細胞白血病 | 實體瘤 | 急性淋巴細胞白血病 | 急性髓性白血病 | 邊緣區(qū)B細胞淋巴瘤 | T細胞淋巴瘤 | 巨球蛋白血癥 | Merck Sharp & Dohme Corp. | 默沙東研發(fā)（中國）有限公司 | Merck Sharp & Dohme LLC | Merck & Co., Inc. | 臨床2/3期 |
| CAR T-cell therapy(Peking University) | ROR1 | 自體CAR-T | 晚期惡性實體瘤 | 中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊第九二〇醫(yī)院 | 北京大學 | 臨床1/2期 |
| ROR1 CAR-T (Oncternal Therapeutics) | ROR1 | 自體CAR-T | 非霍奇金淋巴瘤 | 血液腫瘤 | 實體瘤 | Oncternal Therapeutics, Inc. | 臨床1/2期 |
| EMB-07 | CD3 x ROR1 | 雙特異性T細胞結(jié)合器 | 難治性淋巴瘤 | 肺腺癌 | 膀胱癌 | 乳腺癌 | 子宮癌 | 岸邁生物科技（蘇州）有限公司 | 臨床1期 |
| HDM-2005 | ROR1 | ADC | 難治性淋巴瘤 | 晚期惡性實體瘤 | 杭州中美華東制藥有限公司 | 臨床1期 |
| JCAR-024 | ROR1 | 自體CAR-T | 血液腫瘤 | 中美上海施貴寶制藥有限公司 | 臨床1期 |
| LCB-71 | ROR1 | ADC | 急性淋巴細胞白血病 | LigaChem Biosciences, Inc. | ABL Bio, Inc. | 無錫藥明合聯(lián)生物技術有限公司 | 基石藥業(yè)（蘇州）有限公司 | 臨床1期 |
| LYL-797 | ROR1 | CAR-T | 晚期乳腺癌 | Lyell Immunopharma, Inc. | 臨床1期 |
| NVG-111 | CD3 x ROR1 | 雙特異性T細胞結(jié)合器 | 慢性淋巴細胞白血病 | Novalgen Ltd. | 臨床1期 |
| PRGN 3007 | ROR1 | 自體CAR-T | 急性淋巴細胞白血病 | Precigen, Inc. | Precigen ActoBio, Inc. | 臨床1期 |
| ROR1-CAR-TILs(Guangdong Zhaotai InVivo Biomedicine) | HPK1 x PD-1 x ROR1 | CAR-TILs | 晚期惡性實體瘤 | 腦癌 | 廣東昭泰體內(nèi)生物醫(yī)藥科技有限公司 | 臨床1期 |
| ROR1R-CAR(The University of Texas MD Anderson Cancer Center) | ROR1 | CAR-T | 白血病 | The University of Texas MD Anderson Cancer Center | CLL Global Research Foundation | 臨床1期 |
| SYS-6005 | ROR1 | ADC | 實體瘤 | 石藥集團巨石生物制藥有限公司 | 臨床申請 |
| Anti-ROR1 antibody scFv conjugates(Oncternal) | ROR1 | ADC | 腫瘤 | University of California San Diego | Oncternal Therapeutics, Inc. | 藥物發(fā)現(xiàn) |
| CN114539411 | ROR1 | 單克隆抗體 | 腫瘤 | 山東博安生物技術股份有限公司 | 藥物發(fā)現(xiàn) |
| CN116410317 | ROR1 | ADC | 增生 | 腫瘤 | 四川科倫博泰生物醫(yī)藥股份有限公司 | 藥物發(fā)現(xiàn) |
| NVG-333 | ROR1 | 自體CAR-T | 腫瘤 | Novalgen Ltd. | 藥物發(fā)現(xiàn) |
| ROR1 (生研生物) | ROR1 | CAR-T | 慢性淋巴細胞白血病 | 浙江生研生物科技有限公司 | 藥物發(fā)現(xiàn) |
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Greater than 95% as determined by SDS-PAGE.
Immobilized ROR1 at 2 μg/ml can bind anti-ROR1 antibody (CSB-RA020067A1HU), the EC50 is 0.2450-0.3416 ng/mL.
參考文獻：
[1] https://www.nasdaq.com/press-release/merck-data-ash-2024-annual-meeting-highlights-promising-hematology-pipeline-diverse
[2] https://xueqiu.com/9353448186/307854678
[3] Forrester WC. The Ror receptor tyrosine Kinase family [J]. CMLS Cell Mol Life Sci. 2002, 59:83-06.
[4] Boreherding N, Kusner D, Liu GH, et al. ROR1, an embryonic protein with an emerging role in cancer biology [J]. Protein Cell. 2014, 5:496-502.
[5] Baskar S, K wong KY, .Hofer T, et al. Unique cell surface expression of receptor tyrosine kinase ROR1 in human B-cell chronic lymphocytic leukemia [J]. Clin Cancer Res. 2008, 14:396-404.
[6] Nicholas Borcherding, David Kusner, Guang-Hui Liu, et al. ROR1, an embryonic protein with an emerging role in cancer biology [J]. Protein Cell. 2014, 5(7):496–502.
[7] Mikels AJ, Nusse R. Purified Wnt5a protein activates or inhibits β-catenin–TCF signaling depending on receptor context [J]. PLoS Biol. 2006, 4:e115.
[8] Nomi M, Oishi I, Kani S, et al. Loss of mRor1 enhances the heart and skeletal abnormalities in mRor2-deficient mice: redundant and pleiotropic functions of mRor1 and mRor2 receptor tyrosine kinases [J]. Mol Cell Biol. 2001, 21:8329–8335.
[9] Wamg HY, Lie T, Malbon CC, et al. Structure-function analysis of Frizzleds [J]. Cell Signal. 2006, 18: 934-941.
[10] Zhang, S., Zhang, H., Ghia, E.M., et al. Inhibition of chemotherapy resistant breast cancer stem cells by a ROR1 specific antibody [J]. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2019, 116, 1370–1377.
[11] Islam, S.S., Uddin, M., Noman, A.S.M., et al. Antibody-drug conjugate T-DM1 treatment for HER2+ breast cancer induces ROR1 and confers resistance through activation of Hippo transcriptional coactivator YAP1 [J]. EBioMedicine. 2019, 43, 211–224.
[12] Hanna Karvonen, Harlan Barker, Laura Kaleva, et al. Molecular Mechanisms Associated with ROR1-Mediated Drug Resistance: Crosstalk with Hippo-YAP/TAZ and BMI-1 Pathways [J]. Cells. 2019, 8, 812: 2-12.
