本要點適用于供治療的體內診斷用的利用雜交瘤技術制備的單克隆、抗體，適用于在人體內應用的利用重復DNA技術制備的基因工程抗體

一、雜交瘤技術制備的單克隆抗體

（一）雜交瘤細胞

1、親本細胞

（1）骨髓瘤細胞

SP2/0或其他適宜的骨髓瘤細胞系。應為不合成或不分泌免疫球蛋白鏈型，具有符合骨髓瘤細胞的染色體特征，并有明確的來源歷史及符合要求的保存條件。

（2）免疫親代細胞

經抗原免疫的鼠脾B淋巴細胞或外周血B淋巴細胞。

應有明確的免疫原來源、性質及動物種系，免疫原詳細的制備過程。

適宜的免疫方案及免疫淋巴細胞制備的方法。

2、細胞融合與克隆化

采用適宜的方法進行融合、篩選及克隆化。

3、雜交瘤細胞檢定

（1）抗體分泌穩定性

連續克隆化后抗體陽性率達100%，經體外連續傳代3個月以上和反復凍存、復蘇，細胞系能保持穩定分泌特異性抗體。

（2）細胞核學特征

檢查細胞分裂中期染色體，應符合雜交瘤細胞特征。

4、鼠源病毒檢查

按附錄要求檢測鼠源病毒。

5、支原體檢查

按現行《中國藥典》生物制品無菌試驗規程進行。

6、無菌試驗

按現行《中國藥典》生物制品無菌試驗規程進行。

（二）單克隆抗體的檢定

1、免疫球蛋白類及亞類

用免疫雙擴散法或其他適宜的方法測定。

2、親和力

用可靠、準確的方法測定單克隆抗體（以下簡稱為單抗）的親和常數或相對親和力。一般情況下，對于免疫原為可溶性的單抗，測其親和常數，對于免疫原為顆粒性抗原的單抗，測其相對親和力。

3、特異性

測定單抗對靶抗原的特異性；對多株單抗識別的抗原決定簇進行相關性分析。

4、交叉反應

按附錄要求。

免疫組織化學法測定單抗與人體組織交叉反應，用冰凍及石蠟包埋的各種正常臟器組織測定。來源于腫瘤相關抗原的單抗應進行與各種腫瘤組織的交叉反應試驗。

5、效價測定

用適宜方法測定。

（三）其他原材料

1、細胞培養用小牛血清

支原體檢測應為陰性。經小量試驗適于雜交瘤細胞生長。

2、培養液

應有培養液來源，質量指標。

3、化學試劑

規格應達到分析純以上。

二、基因工程抗體

參考《人用重組DNA制品質量控制技術指導原則》和本指導原則中的有關要求進行。

三、細胞庫的建立

應分別建立原始細胞庫、主細胞庫、工作細胞庫的三級管理細胞庫，一般情況下主細胞庫來自原始細胞庫、工作細胞庫來自主細胞庫。各級細胞庫應有詳細的制備過程、檢定情況及管理規定等。

四、單抗生產

包括用小鼠腹水法和細胞培養法制備。

（一）小鼠腹水法

1、小鼠

制備腹水必需使用合格的SPF級BACB/C小鼠或BACB/C和瑞士小鼠雜交子一代。

2、動物實驗設施

動物實驗設施應有相關部門頒發的二級以上合格證。

3、腹水制備

取適量擴增培養的雜交瘤細胞注射小鼠腹腔制備腹水，小鼠可以預先用液體石蠟或降植烷等處理。

（二）細胞培養法

可以采用發酵罐培養，亦可用細胞培養瓶培養收集上清液制備單克隆抗體。培養基用無牛血清或低牛血清培養基，不能用-內酰胺類抗生素。

（三）抗體純化

可采用鹽析法、分子篩層析、離子交換親和層析等適宜的方法。

1、盡可能選用一些不引起免疫球蛋白聚合、變性等的純化方法及條件。

2、應驗證所用的純化方法能去除可能存在的非目標產物污染，如不需要的免疫球蛋白分子、宿主DNA、用于生產腹水抗體的刺激物、內毒素、其它熱原質、培養液成分或層析柱析出成分等。

3、應驗證所用的純化方法能有效的去除/滅活病毒。

4、連續產生的各批產品必須符合質檢要求，批間具有良好的重復性。

5、純化后處理

必要時對純化后抗體采用適宜方法進行處理。

（四）半成品、成品制備

五、檢定

包括原液（小鼠腹水、細胞培養上清液、純化抗體）、半成品及成品的檢定等。

（一）物理化學檢測

1、外觀

液體制劑應為接近無色微帶乳光的澄清液體，不應含有異物、渾濁或搖不散的沉淀。

2、pH值

電位法測定

3、蛋白質含量的測定

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