蛋白修飾研究最新技術(shù)系列三
日期:2011-05-06 10:28:22
近年來科學(xué)家們越來越關(guān)注蛋白修飾,也初步了解了一些蛋白修飾何時出現(xiàn),這些修飾的作用是什么,比如說磷酸基團修飾能失活,或者激活酶;線粒體蛋白賴氨酸上的乙酰基團修飾會導(dǎo)致代謝改變;組蛋白肽段上的甲基化修飾則能調(diào)控基因表達;SUMO蛋白修飾更是會影響到細胞凋亡,神經(jīng)退行性病變等多個重要細胞進程。
但是這還遠遠不夠,對于哪些肽段會被修飾,在哪兒修飾,這些修飾如何發(fā)生,對于細胞的影響是什么,我們知之甚微。現(xiàn)代質(zhì)譜分析技術(shù)能分析一些類似磷酸化修飾的簡單蛋白修飾,但是要找到像是SUMO蛋白這樣的修飾卻存在技術(shù)上的門檻,研究修飾蛋白的功能更還是處于嬰兒期。不過隨著新技術(shù)的不斷推陳出新,我們對于蛋白修飾的了解也越來越多,在著名的The Scientist雜志上,幾位專家就這一方法,提出了一些新穎的方法,克服了蛋白修飾研究中的難題。
分辨SUMO
SUMO(smallubiquitin?relatedmodifier)是類泛素蛋白家族的重要成員之一,可與多種蛋白結(jié)合發(fā)揮相應(yīng)的功能,其分子結(jié)構(gòu)及SUMO化反應(yīng)途徑都與泛素類似,但二者功能完全不同。SUMO化修飾可參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、核轉(zhuǎn)運、維持基因組完整性及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種細胞內(nèi)活動,是一種重要的多功能的蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式。SUMO化修飾功能的失調(diào)可能導(dǎo)致某些疾病的發(fā)生。
目前研究人員可以通過質(zhì)譜分析,快速了解簡單的翻譯后修飾,比如磷酸化,乙酰化,以及甲基化——消化蛋白,然后識別離子分離后的肽段蛋白殘基,但是由于SUMO修飾,以及其它泛素類修飾本身就是蛋白,而不是一些類似磷酸的小的化合物,因此這種修飾在消化過程中會自行分離,干擾質(zhì)譜軟件的分析。
為了能解決這個問題,來自蘇格蘭細胞信號研究院的Patrick Pedrioli研究員研發(fā)了以一種新型軟件,稱之為SUMmOn,這個軟件利用一種新穎的分析方法,能在質(zhì)譜數(shù)據(jù)中分辨出SUMO修飾來。這一研究成果公布在Nature Methods上。
SUMO修飾蛋白消化后會發(fā)出多個質(zhì)譜信號,這種信號與磷酸基團不同,Pedrioli設(shè)計了SUMmOn,將使用者實驗獲得的譜段與來自一個蛋白數(shù)據(jù)庫中的不同SUMO修飾蛋白譜段進行比對,辨別其中的匹配數(shù)據(jù)。這樣就能就每個SUMO片段譜的相似程度,以及SUMO修飾的蛋白片段相似度打分,從而分辨出SUMO修飾蛋白。
這種方法不僅可以用于SUMO修飾蛋白研究,而且對于類類泛素蛋白的研究都具有重要意義。
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